神经干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠的研究
发布时间：2017-08-18 09:54
本文关键词：神经干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠的研究
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【摘要】：第一部分大鼠神经干细胞的培养及慢病毒介导GFP转染的实验研究 目的 原代培养神经干细胞，并在体外继续分裂增殖、稳定传代，慢病毒介导GFP转染神经干细胞后，可做为移植的种子细胞，满足细胞移植需要。 材料与方法 以健康孕15天Wistar大鼠为实验动物，体外分离并原代培养神经干细胞，之后传代培养，并进行单细胞克隆实验。免疫荧光法和免疫组化SP法对神经干细胞分进行鉴定，，Lentivirus介导转染NSCs。 结果 1．原代培养细胞可形成数十个细胞聚集而成的小神经球(Neurosphere)神经球逐渐增大，7天时神经球已生长成为数百个细胞的大克隆，即可传代培养。传代第7天时已再次长成为数百个细胞聚集的大克隆，将细胞连续传代，细胞的生长模式基本相同。 2．原代培养的神经球经分散再扩增得到的大量神经球呈nestin抗原阳性；神经球可以分化为三种细胞，免疫荧光法和免疫组化SP法检测三种细胞分别呈NSE、CNP、GFAP阳性。 3．慢病毒介导GFP转染NSCs后，荧光显微镜下观察，可见NSCs携带绿色荧光。 结论 1．从大鼠胚胎(孕15天)脑组织中分离的神经干细胞在体外可继续分裂增殖、稳定传代，可满足细胞移植需要。 2．慢病毒介导GFP转染神经干细胞，标记后的神经干细胞做为移植的种子细胞，便于在动物体内进行跟踪研究。 第二部分NSCs移植治疗大鼠血管性痴呆的实验研究 目的 将慢病毒介导GFP标记的NSCs通过海马立体定向注射的方法移植到血管性痴呆模型大鼠，使海马周围的NSCs数量增加，用Morris水迷宫检测系统对实验大鼠作定位航行试验和空间探索实验测试，检测大鼠的学习记忆能力的改变，观察NSCs移植的治疗效果。 材料与方法 月龄12～15个月健康成年Wistar大鼠，体重300～400g，用来制备血管性痴呆2VO模型；传代至第6代的Wistar大鼠神经干细胞，GFP标记后于2VO模型造模35天后海马立体定向注射移植，对假手术组、对照组、NSCs移植组海马组织切片做尼氏染色，观察病理学改变；在缺血4、9、13、17周（移植前和移植后4周、8周、12周）时对移植前后各组大鼠行Morris水迷宫测试，对定位航行实验和空间探索实验结果进行统计分析。 结果 1．神经干细胞移植1周后，大鼠海马区冰冻切片显示有绿色荧光存在，证明神经干细胞可在海马区域存活、增殖。 2．缺血4周时（移植前），NSCs移植组与对照组大鼠各项指标均无显著性差异，但二者与假手术组相比均有显著性差异。缺血9、13、17周（移植后4周、8周、12周）时，NSCs移植组大鼠逃避潜伏期较对照组均明显缩短（P0.05），但与假手术组相比仍明显延长；NSCs移植组穿越平台区次数较对照组也明显增加（P0.05），与假手术组相比仍明显减少(P0.01)；NSCs移植组大鼠平台所在象限停留的时间百分比较对照组明显增加（P0.05，移植后12周除外），但与假手术组相比仍明显减少(P0.05)。 3．NSCs移植组尼氏染色显示神经元丢失、变性情况较对照组有明显改善，神经元细胞形态较完整，胞浆内尼氏小体相对较丰富。 结论 神经干细胞移植到VaD大鼠模型中后，可在一定程度上改善VaD大鼠学习记忆能力。 第三部分Notch通路在神经干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠中的作用研究 目的 检测神经干细胞移植对VaD大鼠海马区Notch1及Hes1表达的动态改变，研究神经干细胞移植对大鼠学习记忆能力的改善与海马区Notch1、Hes1表达的变化是否相关，探讨Notch信号通路是否参与了神经干细胞移植对血管性痴呆大鼠模型的治疗。 材料与方法 月龄12～15个月健康成年Wistar大鼠，体重300～400g，用来制备血管性痴呆2VO模型；传代至第6代的wistar大鼠神经干细胞球，GFP转染标记后做为移植的种子细胞，于2VO模型造模35天后海马立体定向注射移植，对假手术组、对照组、NSCs移植组脑组织海马区蛋白样品进行Western blot检测。 结果 在缺血9周、13周、17周（移植后4周、8周、12周）的Western blot检测检测均提示NSCs移植组Notch1和Hes1表达水平较对照组高，有显著性差异（P0.05），但与假手术组相比仍明显较低（P0.05）；NSCs移植组3个时间点的Notch1和Hes1表达逐渐下降，呈时间依赖性。 结论 移植的NSCs激活了Notch1-Hes1通路，该通路可能参与NSCs移植对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的修复。 第四部分神经干细胞移植治疗对血管性痴呆大鼠突触可塑性的影响 目的 研究神经干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠的过程中是否存在树突与树突棘的形态和结构改变，血管性痴呆大鼠学习记忆能力的改善是否与树突和树突棘的形态和结构改变相关。 材料与方法 月龄12～15个月健康成年Wistar大鼠，体重300～400g，用来制备血管性痴呆2VO模型；传代至第6代的wistar大鼠神经干细胞球，GFP转染标记后做为移植的种子细胞，于2VO模型造模35天后海马立体定向注射移植，对假手术组、对照组、NSCs移植组脑组织海马CA1区树突的分支及树突棘密度进行统计分析。 结果 血管性痴呆对照组及NSCs移植组树突分支数目与假手术组相比均明显减少，有显著性差异，随时间延长下降趋势不明显；NSCs移植组树突分支数目与血管性痴呆模型对照组相比有所增加，有统计学意义（P0.05）。血管性痴呆大鼠模型组和NSCs移植组海马CA1区锥体神经元树突棘密度均明显下降，有统计学意义（P0.05），NSCs移植组树突棘密度与血管性痴呆模型对照组相比则有所增加，差距有统计学意义（P0.05）。 结论 神经干细胞移植增加了血管性痴呆大鼠模型海马CA1区神经元树突的复杂性及树突棘密度，这些改变可能与血管性痴呆大鼠学习、记忆能力的改善相关。
【关键词】：神经干细胞 传代 GFP VaD大鼠 Morris水迷宫测试 尼氏染色 血管性痴呆大鼠 Notch1 Hes1 Western blot检测 神经干细胞移植 树突 树突棘
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.13
【目录】：
- 摘要4-8
- Abstract8-15
- 中英文缩略词表15-16
- 第一部分 大鼠神经干细胞的培养及慢病毒介导 GFP 转染的实验研究16-32
- 1 引言16-17
- 2 材料与方法17-23
- 3 结果23-25
- 4 讨论25-27
- 5 结论27-28
- 6 参考文献28-29
- 7 附图29-32
- 第二部分 NSCs 移植治疗血管性痴呆大鼠的实验研究32-50
- 1 引言32
- 2 材料与方法32-37
- 3 结果37-41
- 4 讨论41-45
- 5 结论45-46
- 6 参考文献46-48
- 7 附图48-50
- 第三部分 Notch 通路在神经干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠中的作用研究50-65
- 1 引言50-51
- 2 材料与方法51-57
- 3 结果57-59
- 4 讨论59-62
- 5 结论62-63
- 6 参考文献63-65
- 第四部分 神经干细胞移植治疗对血管性痴呆大鼠突触可塑性的影响65-80
- 1 引言65-66
- 2 材料与方法66-70
- 3 结果70-71
- 4 讨论71-74
- 5 结论74-75
- 6 参考文献75-79
- 7 附图79-80
- 综述1 脑部 Notch 信号通路的研究进展80-88
- 参考文献86-88
- 综述2 树突棘结构可塑性与学习记忆88-102
- 参考文献98-102
- 个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果102-104
- 致谢104
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 扈荣;钟晓明;;血管性痴呆动物模型的研究概况[J];浙江中医药大学学报;2008年01期
2 刘红梅,高天明,佟振清;急性脑缺血动物模型实验研究进展[J];第一军医大学学报;1999年04期
3 高东;周中和;;实验性血管性痴呆的模型制作问题[J];国外医学(老年医学分册);2002年02期
4 张妍;唐民科;张均田;;树突棘与学习记忆[J];国际神经病学神经外科学杂志;2006年04期
5 李金玲;吕佩源;;活性调节的细胞骨架蛋白在神经突触可塑性中的作用[J];国际神经病学神经外科学杂志;2010年04期
6 胡镜清,温泽淮,赖世隆;Morris水迷宫检测的记忆属性与方法学初探[J];广州中医药大学学报;2000年02期
7 陈燕;;神经元的突触可塑性与学习和记忆[J];生物化学与生物物理进展;2008年06期
8 王蕊,杨秦飞,唐一鹏,房良敏,胡京红,贾绪东,洪庆涛;大鼠拟“血管性痴呆”模型的改进[J];中国病理生理杂志;2000年10期
9 程明高;廖维靖;杨万同;江城;周琴;蒙兰青;闻万顺;;丰富康复训练对大鼠脑缺血再灌注后功能恢复及神经元树突生长的影响[J];中国康复理论与实践;2006年03期
本文编号：693915
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