慢性可卡因戒断大鼠稽延性症状变化及其与海马GSK3 β介导的昼夜节律基因bmal1表达的关系

发布时间：2017-08-22 23:29

  本文关键词：慢性可卡因戒断大鼠稽延性症状变化及其与海马GSK3 β介导的昼夜节律基因bmal1表达的关系

  更多相关文章： 可卡因 稽延性症状 节律紊乱 GSK3β bmal1

【摘要】：目的:药物戒断后的节律紊乱、负性情绪和躯体症状等稽延性症状是导致复吸的一个重要原因。我们的前期研究发现,慢性可卡因戒断不同时间后,其稽延性症状表现不同,并在探索稽延性症状发生的脑内分子机制时发现,生理状态的大鼠磷酸化糖原合成酶激酶3β(p GSK3β)在中脑腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(Nac)、前额皮层(PFC)及视交叉上核(SCN)表现出显著的昼夜节律性,而慢性可卡因处理后p GSK3β在药物奖赏相关的上述四个脑区表达水平和节律性出现异常。有研究显示,糖原合成酶激酶3β(GSK3β)可以间接地影响昼夜节律基因bmal1的表达。本实验通过研究在正常生理状态下及慢性可卡因处理后大鼠GSK3β及昼夜节律基因bmal1在药物成瘾相关脑区——海马中的变化规律,以探讨GSK3β通过影响bmal1的表达在慢性可卡因戒断后稽延性症状产生中的作用及机制,为开发有效防复吸药物奠定理论基础。方法:在本研究中,我们分别探索了慢性可卡因大鼠戒断3天、10天和30天后稽延性症状变化及海马中GSK3β、p GSK3β、bmal1 m RNA的昼夜节律表达情况。首先实验大鼠在12h/12h昼夜环境(早上8:00开灯,下午20:00关灯)适应饲养7天后,分为生理盐水组(saline组)和可卡因组(cocaine组)两大组。对saline组大鼠给予1ml/kg生理盐水连续腹腔注射14天;对cocaine组,给予20mg/kg剂量的可卡因连续腹腔注射14天,然后戒断3天、10天和30天,分别命名为d3、d10和d30组。上述四组的大鼠再分别设置7个时间点,即:ZT0(8:00)、ZT4(12:00)、ZT8(16:00)、ZT12(20:00)、ZT16(24:00)、ZT20(4:00)和ZT24(8:00)。大鼠连续14天腹腔注射后,戒断3天、10天和30天,分别测定各组的大鼠体重增重,采用旷场实验和糖水偏爱实验,观察大鼠活动节律和抑郁症状等稽延性症状,采用western-blot检测海马GSK3β和p GSK3β在上述7个时间点的表达量,采用Realtime-PCR检测bmal1 m RNA在上述7个时间点的表达量。结果:生理盐水处理组大鼠活动具有明显的节律性,晚上活动水平大于白天,在时间点(24:00,ZT16),大鼠活动水平最大,此时GSK3β/p GSK3β的比值最大,而bmal1m RNA表达量最低;慢性可卡因处理后戒断3天时,大鼠稽延性症状主要表现为体重增重减少,抑郁,总体活动水平降低,活动仍有节律性,白天活动水平大于晚上,在时间点(16:00,ZT8),大鼠活动水平最大,此时GSK3β/p GSK3β的比值最大,而bmal1m RNA表达量最低;戒断10天时,主要表现为体重增重减少,轻度抑郁,活动仍有节律性,白天活动水平大于晚上,在时间点(12:00,ZT4),大鼠活动水平最大,此时GSK3β/p GSK3β的比值最大,而bmal1m RNA表达量最低;戒断30天时,主要表现为大鼠活动无昼夜节律性,GSK3β/p GSK3β的比值及bmal1m RNA表达量也无节律性。结论:慢性可卡因大鼠戒断不同时间后其稽延性症状表现各不相同,昼夜节律紊乱会在可卡因戒断后长期存在,可能是导致复吸的主要原因之一;海马GSK3β介导的昼夜节律基因bmal1表达可能在可卡因戒断后昼夜活动节律紊乱中发挥着重要作用。
【关键词】：可卡因 稽延性症状 节律紊乱 GSK3β bmal1
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.6
【目录】：

• 中英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 一、材料和方法14-26
• 1 材料14-19
• 1.1 实验仪器14-15
• 1.2 药品和试剂15-17
• 1.3 相关试剂及配制17-19
• 2 方法19-26
• 2.1 实验动物分组及可卡因给药方案19
• 2.2 可卡因慢性处理大鼠戒断后体重增重的变化19-20
• 2.3 糖水偏爱测试20
• 2.4 可卡因慢性处理大鼠戒断后旷场行为变化20
• 2.5 Western blot法检测GSK3β 和pGSK3β 的蛋白表达水平20-22
• 2.5.1 组织总蛋白质的提取20-21
• 2.5.2 蛋白质浓度的测定21
• 2.5.3 western blot操作步骤21-22
• 2.5.4 数据处理22
• 2.6 Realtime-PCR法检测bmal1的mRNA表达水平22-25
• 2.6.1 组织总RNA的提取22-23
• 2.6.2 组织总RNA的浓度及纯度的测定23
• 2.6.3 组织总RNA的完整性测定23
• 2.6.4 逆转录反应23-24
• 2.6.5 PCR反应24
• 2.6.6 实验原理和数据处理24-25
• 2.7 统计分析25-26
• 二、结果26-32
• 1 可卡因慢性处理大鼠戒断后体重增重的变化26-27
• 2 可卡因慢性处理大鼠戒断后糖水偏爱行为的变化27-28
• 3 可卡因慢性处理大鼠戒断后旷场行为的变化28-29
• 4 海马GSK3β/pGSK3β 表达水平及节律的变化29-31
• 5 海马昼夜节律基因bmal1 mRNA表达的变化31-32
• 三、讨论32-36
• 1 慢性可卡因戒断后稽延性戒断症状变化的分析32-33
• 1.1 慢性可卡因戒断后躯体症状变化的分析32
• 1.2 慢性可卡因戒断后情绪变化的分析32-33
• 1.3 慢性可卡因戒断后节律紊乱的分析33
• 2 慢性可卡因戒断后大鼠海马GSK3β/pGSK3β 表达水平变化的分析33-34
• 3 慢性可卡因戒断后大鼠海马昼夜节律基因bmal1 mRNA表达水平变化的分析34-36
• 四、结论36-37
• 参考文献37-41
• 致谢41-42
• 综述42-48
• 参考文献47-48

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本文编号：721695