齐拉西酮对LPS引起的小胶质细胞活化作用的研究

发布时间：2017-08-23 04:28

  本文关键词：齐拉西酮对LPS引起的小胶质细胞活化作用的研究

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【摘要】：背景:精神分裂症是一种致残性极高的慢性重性精神疾病,人群终生患病率近1%,其病理机理至今仍未明确。研究显示,神经元的毒性损害与精神分裂症大脑结构变化和病程进展有关,而氧化应激启动的小胶质细胞活化,产生大量致炎性自由基、细胞因子等可以对神经元造成直接的毒性损害。诱导性NO合酶(i NOS)和NADPH氧化酶(NOX2)是小胶质细胞氧化应激的关键酶,i NOS和NOX2的激活可以产生一系列细胞因子从而对神经元产生损伤,抑制这两个关键酶的表达和激活可以抑制小胶质细胞的活化从而对神经元细胞产生保护作用。目的:通过利用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)建立小胶质细胞在体和离体炎症模型,聚焦于小胶质细胞活化的关键酶i NOS和NOX2及其活化后的氧化应激产物,来探讨在体和离体中非典型抗精神病药物对活化小胶质细胞活化的作用并探索其作用的机制。方法:1、通过腹腔注射LPS建立在体动物脑内系统炎症模型;2、运用ELISA法检测齐拉西酮对离体小胶质活化后NO表达的作用。3、通过免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度齐拉西酮对在体和离体小胶质细胞诱导性一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达的作用;4、通过western blot的方法检测齐拉西酮对在体小胶质细胞NOX2亚单位gp91phox表达的影响。5、通过Oxyblot方法检测药物对在体和离体小胶质细胞蛋白氧化(蛋白羰基化水平)的作用;6、通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测齐拉西酮对在体和离体小胶质细胞i NOS m RNA的作用。结果:在体部分:1、LPS引起纹状体部位i NOS表达的升高;2、LPS引起的纹状体部位i NOS的升高可以被齐拉西酮抑制而不能被舒必利抑制。3、LPS对纹状体部位NOX2亚单位gp91phox的表达无明显作用。4、齐拉西酮能抑制LPS引起的蛋白羰基化产物的升高。5、齐拉西酮能抑制LPS引起的i NOS m RNA的升高。离体部分:1、齐拉西酮可以抑制LPS引起小胶质细胞活化所释放的NO量;2、齐拉西酮可以抑制LPS引起的BV-2小胶质细胞内i NOS以及i NOS m RNA的表达增高。3、齐拉西酮能抑制BV-2小胶质细胞活化后细胞蛋白羰基化产物的升高。4、、LPS和齐拉西酮对BV-2小胶质细胞NOX2亚单位gp91phox的表达无明显作用。结论:非典型抗精神病药物可以通作用于小胶质细胞的两个关键酶i NOS以及NOX2来抑制小胶质细胞的活化,从而对神经元产生保护作用,但其作用机制尚需进一步探索。意义:我们对于非典型抗精神病药物对于小胶质细胞活化作用机制的研究,有助于我们明确新型抗精神病药物的药物作用机理、指导临床合理用药,更有助于我们深刻理解精神分裂症的病因机制,为明确精神分裂症临床治疗的新靶标提供理论基础,并为人类最终治愈精神分裂症找到科学的金钥匙。
【关键词】：齐拉西酮 小胶质细胞 iNOS NOX2 氧化应激
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.3
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 符号与缩写12-14
• 第一章 绪论14-23
• 1.1 精神分裂症的小胶质细胞假说14-16
• 1.2 小胶质细胞的活化16-18
• 1.3 精神分裂症的抗炎治疗18-20
• 1.4 非典型抗精神病药物与小胶质细胞20-23
• 第二章 在体实验部分23-43
• 2.1 背景介绍23-24
• 2.2 实验材料与仪器24-25
• 2.2.1 实验动物24
• 2.2.2 实验试剂与耗材24-25
• 2.2.3 实验仪器25
• 2.2.4 溶液的配置25
• 2.3 实验方法25-31
• 2.3.1 实验动物分组25-26
• 2.3.2 腹腔注射大鼠系统验证模型的建立26
• 2.3.3 实验切片的制作26
• 2.3.4 免疫荧光检测26-27
• 2.3.5 大鼠在体细胞蛋白提取27
• 2.3.6 BCA法测蛋白浓度27-28
• 2.3.7 Western blot法检测蛋白表达28-29
• 2.3.8 Oxyblot法检测蛋白浓度29-30
• 2.3.9 RNA的提取30
• 2.3.10 逆转录30-31
• 2.4 数据统计方法31
• 2.5 实验结果31-39
• 2.5.1 腹腔注射LPS诱导大鼠系统炎性模型的建立31-33
• 2.5.2 腹腔注射LPS对纹状体部位iNOS表达的作用33-34
• 2.5.3 药物对LPS引起的小胶质细胞iNOS表达的作用34-36
• 2.5.4 腹腔注射LPS对小胶质细胞NOX2亚单位gp91phox的影响36-37
• 2.5.5 药物对LPS引起的在体蛋白氧化产物的影响37-38
• 2.5.6 药物对LPS引起的在体小胶质细胞iNOSmRNA表达的影响38-39
• 2.6 讨论39-42
• 2.7 小结42-43
• 第三章 离体实验部分43-57
• 3.1 前言43-44
• 3.2 实验材料与仪器44-46
• 3.2.1 实验细胞株44
• 3.2.2 实验试剂与耗材44-45
• 3.2.3 实验仪器45
• 3.2.4 溶液的配置45-46
• 3.3 实验方法46-49
• 3.3.1 小胶质细胞的培养46
• 3.3.2 细胞的冻存46
• 3.3.3 细胞的复苏46-47
• 3.3.4 MTT法检测细胞活性47
• 3.3.5 ELISA法测NO浓度47-48
• 3.3.6 细胞蛋白提取48
• 3.3.7 BCA法测蛋白浓度48
• 3.3.8 Western blot操作步骤48
• 3.3.9 Oxyblot操作步骤48
• 3.3.10 RNA提取48-49
• 3.3.11 逆转录49
• 3.3.12 数据分析方法49
• 3.4 结果49-54
• 3.4.1 MTT法测药物对小胶质细胞生存率的影响49-50
• 3.4.2 药物对小胶质细胞活化后释放NO浓度的影响50-51
• 3.4.3 齐拉西酮对小胶质iNOS表达的影响51-52
• 3.4.4 齐拉西酮对小胶质细胞氧化蛋白表达的影响52
• 3.4.5 LPS和齐拉西酮对gp91~(phox)表达作用的影响52-53
• 3.4.6 齐拉西酮对小胶质细胞iNOS mRNA表达作用的影响53-54
• 3.5 讨论54-56
• 3.6 小结56-57
• 第四章 总结57-59
• 4.1 主要工作与创新点57
• 4.2 后续研究工作57-59
• 参考文献59-67
• 致谢67

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本文编号：722974