Theacrine对水浸拘束应激负荷小鼠海马神经元增殖的影响及机制研究

发布时间：2017-08-27 05:23

  本文关键词：Theacrine对水浸拘束应激负荷小鼠海马神经元增殖的影响及机制研究

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【摘要】：目的：建立水浸拘束应激（CWIRS）负荷小鼠抑郁模型，研究1,3,7,9-四甲基尿酸（Theacrine, Tc）对CWIRS诱导的小鼠抑郁样症状的影响，并从神经再生的角度去探讨其作用机制。 方法：（1）药效考察：采用CWIRS建立小鼠抑郁症模型，用经典的行为学实验（悬尾实验、强迫游泳、高价十字迷宫以及糖水偏爱实验）评价造模效果以及考察药物的干预作用；用自发活动箱对给药后小鼠的自发活动进行测定，以考察药物对小鼠是否有中枢兴奋作用；采用HPLC-ESA方法检测CWIRS对小鼠海马中神经递质含量的影响以及给予Tc干预后神经递质含量变化。（2）作用机制探究：采用HPLC-UV方法分析考察Tc对CWIRS小鼠血浆中皮质酮(corticosterone, CORT)含量的影响；采用免疫荧光技术考察Tc对CWIRS小鼠海马神经元增殖的影响。此外，本课题还采用HPLC方法来分析考察Tc对小鼠海马组织中磷酸二酯酶（PDEs）活性的影响；用ELASA方法考察Tc对PC12细胞中cAMP含量的影响；采用Western blotting方法考察Tc对CWIRS小鼠海马组织中CREB、p-CREB、BDNF、TrkB及p-TrkB等蛋白表达的影响。最后，建立了皮质酮损伤细胞模型，用Western blotting方法考察Tc对PC12细胞中CREB、p-CREB、BDNF、TrkB及p-TrkB等蛋白表达的影响，给予Rp-cAMP后，再次考察Tc对上述蛋白表达的影响。 结果：CWIRS导致小鼠出现抑郁样症状，表现为绝望、焦虑、兴趣缺乏以及海马组织中5-hydroxytryptamine（5-HT）含量显著降低，而5-hydroxy indole aceticacid（5-HIAA）含量显著升高等。给予Tc及Ca可以有效改善应激小鼠抑郁样行为，表现为缩短应激后小鼠强迫游泳和悬尾实验中的不动时间，延长应激小鼠在十字迷宫实验中进入开放臂的时间和增加进入开放臂的次数，逆转应激导致小鼠糖水偏嗜度降低现象以及改善应激导致的海马5-HT水平低下这一症状。机制研究发现，CWIRS可以导致小鼠血浆CORT水平显著升高，而只有Tc可以逆转应激导致的CORT水平升高作用；免疫荧光结果表明，，Ca和Tc均可以改善应激导致的海马BrdU+/DCX+阳性细胞数降低这一作用。进而我们又从分子水平探究了Tc促进神经元增殖的分子机制，体内结果显示，Ca和Tc促进CWIRS小鼠海马组织中p-CREB、BDNF及p-TrkB等蛋白表达。在体外细胞模型上也发现，200μM皮质酮会导致细胞中p-CREB、BDNF及p-TrkB等蛋白表达水平降低，Tc和Ca可以有效逆转这一作用，而Rp-cAMP完全拮抗了Tc促进p-CREB蛋白表达的作用，部分拮抗了Tc促进BDNF和p-TrkB蛋白表达的作用，而Ca促进p-CREB、BDNF、p-TrkB等蛋白表达的作用被Rp-cAMP全部拮抗。 结论：由动物实验可知和Tc和Ca均可以改善CWIRS诱导的小鼠抑郁样状态，且Ca有一定的中枢兴奋作用，该作用可能介导了其抗抑郁作用的发挥，而Tc则无中枢兴奋作用。Tc抗抑郁作用的机制可能是通过降低应激小鼠血浆皮质酮水平，从而改善慢性应激诱导致的小鼠海马神经元增殖抑制作用。Tc通过激活cAMP/CREB/BDNF/TrkB信号通路来促进小鼠海马神经元增殖水平，从而改善应激诱导的小鼠抑郁样症状，有望开发成为神经元保护剂，成为新型的抗抑郁药物。
【关键词】：抑郁 慢性水浸拘束应激 1 3 7 9-四甲基尿酸 咖啡因 神经元增殖
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.4
【目录】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-6
• 英文缩略词表6-7
• 目录7-10
• 1. 前言10-20
• 1.1 抑郁症10-13
• 1.1.1 抑郁症的特征10-11
• 1.1.2 抑郁症解剖学基础11-12
• 1.1.3 抑郁症发病机制12-13
• 1.2 应激与抑郁症的关系13-16
• 1.2.1 抑郁症与应激13-16
• 1.3 抑郁症的治疗16-17
• 1.3.1 抗抑郁药16-17
• 1.3.2 其他非药物治疗17
• 1.4 嘌呤生物碱与情绪调节17-19
• 1.5 立题依据19-20
• 2. Tc 对应激负荷小鼠抑郁症状的影响20-32
• 2.1 实验材料20-21
• 2.1.1 实验动物20
• 2.1.2 主要试剂20
• 2.1.3 主要设备20-21
• 2.2 实验方法21-24
• 2.2.1 CWIRS 的建立21
• 2.2.2 悬尾实验（Suspension test, TST）21
• 2.2.3 强迫游泳（Forced swimming test, FST）21-22
• 2.2.4 高架十字迷宫测试（Elevated plus maze test, EPMT）22
• 2.2.5 糖水偏爱实验（Sucrose preference test, SPT）22
• 2.2.6 自发活动实验（Spontaneous motor activity test, SMAT）22-23
• 2.2.7 海马中神经递的测定23
• 2.2.8 统计学处理23-24
• 2.3 实验结果24-29
• 2.3.1 Tc 对小鼠悬尾不动时间的影响24
• 2.3.2 Tc 对小鼠强迫游泳不动时间的影响24-25
• 2.3.3 Tc 对小鼠十字迷宫开放臂停留时间和进入次数的影响25-26
• 2.3.4 Tc 对小鼠糖水偏嗜度的影响26-27
• 2.3.5 Tc 对小鼠自发活动的影响27-28
• 2.3.6 Tc 对小鼠海马中 5-HT 和 5-HIAA 含量的影响28-29
• 2.4 小结与讨论29-32
• 3. Tc 抗抑郁作用机制研究32-48
• 3.1 实验材料32-34
• 3.1.1 动物的饲养32
• 3.1.2 PC12 细胞的复苏、传代及冻存32
• 3.1.3 实验试剂32-33
• 3.1.4 实验设备33-34
• 3.2 实验方法34-37
• 3.2.1 小鼠血浆样品处理34-35
• 3.2.2 皮质酮标准溶液配制及标准曲线绘制35
• 3.2.3 血浆中皮质酮含量测定35
• 3.2.4 海马组织切片样品处理35-36
• 3.2.5 神经元增殖细胞数测定36
• 3.2.6 双管法测定 PDEs 活性36
• 3.2.7 PC12 细胞中 cAMP 的含量测定36
• 3.2.8 皮质酮损伤细胞模型建立36-37
• 3.2.9 蛋白质印迹法（western blotting）测定相关蛋白表达37
• 3.3 结果37-44
• 3.3.1 Tc 逆转应激导致的血浆皮质酮升高作用37-38
• 3.3.2 Tc 改善应激对海马神经元增殖的抑制作用38-39
• 3.3.3 Tc 抑制以 cAMP 为底物的 PDEs 的活性39-40
• 3.3.4 Tc 促进 PC12 细胞中 cAMP 的分泌40-41
• 3.3.5 Tc 激活 CREB/BDNF/TrkB 信号通路41-44
• 3.4 小结与讨论44-48
• 4 总结与展望48-52
• 4.1 问题与讨论48
• 4.2 结果与讨论48-50
• 4.3 创新与突破50
• 4.4 前景与展望50-52
• 参考文献52-64
• 附录64-65
• 1. 已申请专利64
• 2. 已投稿文章64-65
• 致谢65-67

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