天麻素对过氧化氢诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡的保护作用

发布时间：2017-08-31 12:42

  本文关键词：天麻素对过氧化氢诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡的保护作用

  更多相关文章： 天麻素 神经退行性疾病 过氧化氢 PC12细胞 凋亡 磷脂酰肌醇3激酶 反转录-聚合酶链式反应 免疫荧光双标记 Hoechst33342/PI双染

【摘要】：[目的]通过构建过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)、诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(Pheochromocytoma Cells,PC12)为模型,从细胞、分子和蛋白层面探讨天麻素(Gastrodin, GAS)对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用。 [方法]用H2O2刺激PC12细胞构建凋亡模型。将体外培养的PC12细胞随机分成空白对照组、H2O2(200μmol/L,12h)处理组、不同浓度GAS(80.120.160μmol/ml)+H2O2处理组、不同浓度的GAS+H2O2(200μmol/L)+wortmannin (1μmol/L)共同处理组。采用免疫荧光双标记检测方法(double-immunofluorescence labeling assay)在荧光显微镜下观察细胞内肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor, TNF-α)、白介素-1β (interleukin-1β, IL-1β)过氧化氢酶(catalase, CAT)、糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)表达的变化；应用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)检测GR、CAT、TNF-α和IL-1p的mRNA水平的变化：并用Hoechst33342/碘化丙啶(propidine lodide,PI)双染观察凋亡细胞形态学变化。 [结果]PC12细胞以5×105个/m1浓度接种于六孔板中,当密度均匀生长至80%时预处理80、120、160μmol/ml的GAS1h后,加入H2O2(200μmol/L)刺激,经过免疫荧光双标记检测方法,RT-PCR、Hoechst33342/PI双染分析,得到结果：不同浓度的GAS在转录水平和翻译水平上明显抑制了H202诱导的TNF-α和IL-1p的上调,激活了CAT、GR的上调,并且表达程度呈剂量依赖性。 [结论]GAS通过PI3K/Akt通路可以抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡因子的释放,发挥其神经抗凋亡作用,从而起到保护神经细胞的作用,表明GAS作为一种抗神经凋亡药物的潜质得到证实,为临床应用GAS治疗神经退行性疾病提供了新的生物学依据。
【关键词】：天麻素 神经退行性疾病 过氧化氢 PC12细胞 凋亡 磷脂酰肌醇3激酶 反转录-聚合酶链式反应 免疫荧光双标记 Hoechst33342/PI双染
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.1
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 实验仪器、试剂及其配制12-22
• 结果22-37
• 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-42
• 综述42-49
• 参考文献46-49
• 在读期间发表的文章49-50
• 致谢50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 尹兆宝;吴洪梅;林松华;邓世印;;炎症与阿尔茨海默病[J];国外医学(老年医学分册);1998年06期

2 付艳玲;薛寿儒;;氧化应激与阿尔茨海默病以及抗氧化治疗研究进展[J];国际神经病学神经外科学杂志;2010年04期

3 黄丹华;周珊珊;张黎明;;氧化应激与阿尔茨海默病[J];国际神经病学神经外科学杂志;2012年03期

4 吴惠玲;文国强;王冰雁;;阿尔茨海默病的细胞凋亡机制[J];海南医学;2010年01期

5 王春艳;郭景森;田晶;崔万丽;;β淀粉样蛋白与阿尔茨海默病[J];吉林医药学院学报;2009年02期

6 黄建梅,唐一鹏,洪庆涛;抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤海马神经元凋亡调控基因表达的影响[J];北京中医药大学学报;2002年01期

7 董雯;郑爽;冯志强;;阿尔茨海默病病因及发病机制的研究[J];中国老年保健医学;2011年01期

8 陶春;张东威;罗明惠;刘清华;赵静华;林琳;强欣;张娟;刘庆鸿;;阿尔茨海默病与β-淀粉样蛋白[J];内蒙古医学杂志;2013年10期

9 章必成,张巍;TNF,p38 MAPK与细胞凋亡[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2001年06期

10 陈新平,陈彪;阿尔茨海默病病因学及发病机制研究进展[J];中国现代神经疾病杂志;2005年03期

，

本文编号：765667