改良的胎鼠海马神经元原代培养及模拟糖尿病并发抑郁环境对其的损伤作用

发布时间：2017-09-04 17:21

  本文关键词：改良的胎鼠海马神经元原代培养及模拟糖尿病并发抑郁环境对其的损伤作用

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【摘要】：目的:建立一种改良的胎鼠海马神经元原代培养方法,研究模拟糖尿病并发抑郁(diabetes mellitus with depression,DD)环境对其的损伤作用。方法:取胎龄18 d的SD大鼠,体视显微镜下分离海马,0.25%胰蛋白酶和0.2%胶原酶(1∶1)消化后进行体外培养,分别观察培养后4 h、24 h、5 d、8 d、14 d海马神经元的基本形态结构;神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。采用高糖联合皮质酮造模构建类似糖尿病并发抑郁症状的模拟DD环境,MTT法检测神经元的存活率;流式AnnexinV/PI双染和Hoechst荧光染色检测神经元的凋亡情况。结果:经NSE免疫细胞化学鉴定,培养7 d后的神经元纯度达95%以上,细胞胞体成球形,树突分支明显,并相互交织成丰富的神经网络;高糖、皮质酮及两者联用造模18 h后,与正常对照组相比,MTT检测细胞存活率分别为53.1%、64.3%和56.7%,P0.05;流式细胞仪检测正常对照组、高糖组、皮质酮组、两者联用组Q3区的比例(分别为71.6%、47.9%、53.6%和39.2%),明显低于阴性对照组(98.5%),P0.05。后四者Q2+Q4区总比例分别为24.4%、46.6%、40.4%、67.0%;Hoechst染色结果提示上述三个造模组的神经元细胞核均出现不同程度的核染色质聚集、浓缩,甚至核碎裂,呈现出典型的凋亡特征。结论:成功建立一种操作简便、细胞纯度佳、活性好、产率高的胎鼠海马神经元原代培养方法,验证了模拟DD环境对海马神经元的损伤作用,为体外深入研究DD的发病机制及药物防治提供了实验依据。
【作者单位】： 湖南中医药大学第一附属医院;湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地;
【关键词】： 细胞培养 海马神经元 糖尿病 抑郁症 模拟DD环境 凋亡 胎鼠
【基金】：国家自然科学基金(81373578,81573965,81403379) 湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验培育基地开放基金资助项目(ZYFT201401)
【分类号】：R587.2;R749.4
【正文快照】： 海马是神经元高度集中的部位,其在调控学习、记忆、情绪等生理功能方面发挥着重要作用,同时又是癫痫、抑郁等神经变性疾病的主要病灶区。Banker和Cowan[1,2]首次在体外成功分离并培养了大鼠胚胎海马神经元,此后随着实验对细胞标本要求的提高,如何建立一种操作简便、稳定,细胞

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7 苗庆峰;张伟;薛健梅;陈雪彦;张永健;;Aβ_(25～35)对海马神经元的损伤及双苯氟嗪的保护作用[J];中国老年学杂志;2008年22期

8 汤欣;陈益人;周松林;丁斐;;神经再生素促大鼠海马神经元生长的研究[J];解剖学报;2008年01期

9 吴洋;张永健;苗庆峰;薛健梅;高霄飞;;双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤的保护作用[J];宁夏医科大学学报;2009年01期

10 鄂晓;姜爽;张英鸽;;海马神经元之间膜性连接的初步研究[J];军事医学科学院院刊;2010年05期

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1 刘蓓蓓;潘昊;陈娣;谢学猛;杨光田;;外源性硫化氢对大鼠海马神经元氧糖缺失/恢复损伤的作用[A];中华医学会急诊医学分会第十六次全国急诊医学学术年会论文集[C];2013年

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4 刘卫;郭华;郑建全;刘振伟;刘传缋;;苯环壬酯对烟碱诱发海马神经元兴奋性突触后电流的抑制作用[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集（第二部分）[C];2002年

5 蒋霞;朱传凤;江雅新;孙岚;张英鸽;;海马神经元的原子力显微成像[A];全国第七届扫描隧道显微学学术会议（STM'7）论文集（一）[C];2002年

6 叶伟;裘燕;刘富鑫;钟伟霞;罗建红;;咪唑安定对小鼠海马神经元放电模式的影响[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

7 石素琴;蔡志平;霍东升;石岩;贾建新;;海马神经元的扫描电镜观察[A];科技创新与经济结构调整——第七届内蒙古自治区自然科学学术年会优秀论文集[C];2012年

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