miRNA-200c-3p调控阿尔茨海默病的分子机制研究

发布时间：2017-09-10 21:41

  本文关键词：miRNA-200c-3p调控阿尔茨海默病的分子机制研究

  更多相关文章： miR-200c-3p CREB 海马 阿尔茨海默病

【摘要】：miR-200c-3p属miR-200家族成员之一,研究证据显示在亨廷顿病和脑缺血小鼠模型脑组织中其表达上调,这提示miR-200c-3p在CNS的发育分化和衰老退化进程中可能发挥着重要的作用。CREB是真核生物中一种关键核转录因子,它能增强突触联系,影响神经元的可塑性和神经营养因子的合成,与学习记忆功能密切相关。生物信息学分析显示,CREB1 mRNA3'-UTR序列上存在着miR-200c-3p的预测结合位点,但miR-200c-3p调控CREB1表达的具体机制以及它对阿尔茨海默病的调控作用目前尚不清楚。目的：通过比较阿尔茨海默病模型小鼠和对照组小鼠海马组织中miR-200c-3p和CREB1表达差异,找出两者表达变化与阿尔茨海默病的相关性,探究miR-200c-3p对关键核转录因子CREB1表达的调控,揭示miR-200c-3p调节阿尔茨海默病的分子机制。方法：清洁级健康雄性昆明种小鼠,适应性喂养1周后随机分为两组。阿尔茨海默病模型组每日腹腔注射D-半乳糖90 mg/kg(生理盐水配制)和AICl340 mg/kg(生理盐水配制)溶液,连续90 d；对照组腹腔注射等量的生理盐水。在造模过程中观察小鼠的一般情况,每周对小鼠进行一次称重并记录体重变化情况。采用新物体识别实验检测阿尔茨海默病模型小鼠与对照组小鼠学习记忆能力。采用实时荧光定量PCR检测小鼠海马组织中miR-200c-3p的表达。Western-blot检测海马组织中关键核转录因子CREB1蛋白的表达水平。构建含CREB1 mRNA3'-UTR虫荧光素酶基因报告载体pGL3C-CREB1 UTR和pGL3C-CREB1 UTR mutant,分别与miR-200c-3p mimic或其阴性对照共转染HEK293细胞,使用promega公司的双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测荧光素酶活性,分析miR-200c-3p对CREB1表达的调控。miR-200c-3p mimic或miR-200c-3p inhibitor分别转染Neuro2a细胞,以增加或减少细胞内miR-200c-3p的内源性表达,24h后收样,通过Western Bolt检测CREB1蛋白表达量,验证miR-200c-3p对CREB1表达的调控作用。结果：(1)小鼠腹腔注射D-gal和AICl3后第6周至造模结束模型组小鼠体重明显低于对照组小鼠,差异具有统计学意义。(2)物体识别实验结果显示,阿尔茨海默病模型组小鼠探索新物体所用的时间少于对照组(P0.01)；阿尔茨海默病小鼠的分辨指数明显低于对照组小鼠(P0.001),表明D-gal联合AICl3诱导的阿尔茨海默病模型小鼠其物体识别记忆能力降低。(3)实时荧光定量PCR检测结果显示,阿尔茨海默病模型小鼠海马组织中miR-200c-3p表达量显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。 (4) Western blot检测结果显示,阿尔茨海默病小鼠海马组织中CREB1蛋白表达显著低于对照组(P0.01)。(5)双荧光素酶报告基因实验结果显示,pGL3C-CREB1 3'UTR和miR-200c-3p mimic共转染时,虫荧光素酶的活性明显被抑制(P0.05)；而将PGL3C-CREB1 3'UTR中miR-200c-3p的结合位点突变,变成新的载体PGL3C-CREB1 3'UTR mutant,与miR-200c-3p共转染时,虫荧光素酶的活性未见明显变化。双荧光素酶报告基因实验结果说明miR-200c-3p能够与CREB1 mRNA3'UTR结合抑制CREB1的表达。(6)Western Bolt结果显示,与空白对照组相比,转染miR-200c-3p mimic的Neuro2a细胞,其CREB1蛋白的表达受到明显抑制(P0.01),而转染miR-200c-3p inhibitor的细胞,CREB1蛋白的表达量明显增加(P0.01)。结论：本研究表明,D-gal联合AlCl3诱导的阿尔茨海默病小鼠海马组织中,miR-200c-3p的表达增强,关键核转录因子CREB1的表达受到抑制；miR-200c-3p是通过与CREB1 mRNA 3'UTR序列结合,抑制CREB1蛋白的表达,参与对阿尔茨海默病的调节。
【关键词】：miR-200c-3p CREB 海马 阿尔茨海默病
【学位授予单位】：长江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 缩略词表8-10
• 第1章 绪论10-12
• 第2章 研究报告12-36
• 2.1 前言12
• 2.2 材料12-17
• 2.3 方法17-26
• 2.4 结果26-32
• 2.5 讨论32-35
• 2.6 结论35-36
• 致谢36-37
• 参考文献37-41
• 附：技术路线图41-42
• 综述一 MicroRNA在阿尔茨海默病中的研究进展42-48
• 参考文献46-48
• 综述二 CREB在神经系统中的研究进展48-55
• 参考文献51-55
• 个人简介55-56

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本文编号：826837