视黄醇X受体出核抑制对神经元细胞凋亡的影响

发布时间：2017-09-11 14:01

  本文关键词：视黄醇X受体出核抑制对神经元细胞凋亡的影响

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【摘要】：目的:检测AD病理状态下N2a细胞、小鼠海马组织RXRα亚细胞定位及神经元过度凋亡的改变,利用RXRα配体9-cis-RA抑制RXRα出核,研究这种抑制作用对神经元细胞过度凋亡的影响。方法:以分别经过Aβ、Aβ及9-cis-RA共处理的N2a细胞、C57BL/6小鼠及其对照组为研究对象。N2a细胞采用细胞培养方法进行培养,按照实验要求和目的分组培养以及细胞搜集与处理,包括蛋白提取、核质分离与细胞爬片等;C57BL/6小鼠根据实验要求和目的分组进行药物海马定位注射并在规定时间内进行饲养,并及时取脑,对海马组织进行蛋白提取、核质分离与制作脑切片等。N2a细胞应用Western Blot、实时荧光定量PCR及核质分离等技术分别检测RXRα、Nur77蛋白总含量、mRNA表达水平及其在细胞核与细胞质中含量的变化,并通过细胞免疫荧光染色技术观察RXRα、Nur77亚细胞定位;应用MTT、DAPI染色、流式细胞仪以及Bcl-2与Bax含量检测等方法观察细胞凋亡情况,并与上述RXRα、Nur77亚细胞定位关联。C57BL/6小鼠应用Western Blot及核质分离等技术检测海马区RXRα、Nur77蛋白总含量及其在细胞核与细胞质中含量的变化,并在小鼠脑切片海马区通过免疫荧光染色技术观察RXRα、Nur77亚细胞定位;应用DAPI染色以及Bcl-2与Bax含量检测等方法观察细胞凋亡情况,并与上述RXRα、Nur77亚细胞定位关联。结果:N2a细胞经Aβ处理24h后,RXRα和Nur77的mRNA表达水平及蛋白量均无明显变化,但RXRα、Nur77在细胞质中的含量与分布增多,RXRα与Nur77分别从对照组的5.26%、4.85%增至Aβ25-35处理组的42.2%、35.5%;细胞凋亡率从对照组4.36%增至Aβ25-35处理组15.1%。而N2a细胞经9-cis-RA预先处理12h,再经Aβ处理24h后,与未经9-cis-RA预先处理的对照组比较,RXRα和Nur77的mRNA表达水平及总蛋白量均无明显变化,但RXRα、Nur77在细胞质中的含量与分布明显减少,分别从对照组的42.2%、35.5%减少至9-cis-RA处理组的6.67%、5.44%;细胞凋亡率从对照组15.1%减至9-cis-RA处理组5.31%。C57BL/6小鼠经Aβ处理24h后,RXRα、Nur77总蛋白量变化无明显差异,但RXRα、Nur77在细胞质中的含量与分布增多,分别从对照组的26.1%、11.1%增至Aβ25-35处理组的59.2%、73.7%;细胞凋亡也明显增多。而C57BL/6小鼠经9-cis-RA预先处理12h,再经Aβ处理24h后,与未经9-cis-RA预先处理的对照组比较,RXRα、Nur77总蛋白量变化无明显差异,但RXRα、Nur77在细胞质中的含量与分布减少,分别从对照组的59.2%、73.7%减少至9-cis-RA处理组的30.2%、19.8%;细胞凋亡也明显相应减少。结论:Aβ处理可导致RXRα、Nur77出核;Aβ处理可诱导神经元细胞凋亡;RXRα出核抑制可降低由Aβ引发的神经元细胞凋亡。
【关键词】：Aβ 9-cis-RA 阿尔茨海默病 RXRα Nur77 核质穿梭 凋亡
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-26
• 1. 材料13-15
• 2. 方法15-26
• 2.1 细胞培养15-16
• 2.2 AD模型小鼠构建16
• 2.3 Western Blot检测 N2a 细胞和脑海马中 RXRα、Nur77、Bax16-21
• 2.4 荧光定量PCR测定细胞中的 RXRα/Nur77 基因的 m RNA 表21-22
• 2.5 细胞免疫荧光测定细胞 RXRα 和 Nur77 蛋白的细胞亚定位22-23
• 2.6 冰冻切片免疫荧光测定 RXRα 和 Nur77 蛋白的亚细胞定位23-24
• 2.7 细胞凋亡检测24-26
• 结果26-42
• 1. N2a细胞26-36
• 1.1 9-cis-RA抑制由Aβ 引发的RXRα 与Nur77出核26-32
• 1.2 9-cis-RA抑制由Aβ 引发的细胞凋亡32-36
• 2. 小鼠脑海马组织36-42
• 2.1 9-cis-RA抑制由Aβ 引发的RXRα 与Nur77出核36-39
• 2.2 9-cis-RA抑制由Aβ 引发的细胞凋亡39-42
• 讨论42-45
• 结论45-46
• 参考文献46-49
• 综述49-58
• 参考文献55-58
• 致谢58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 邓钰蕾;陈生弟;;阿尔茨海默病治疗研究在困境中进展[J];中国实用内科杂志;2011年01期

2 贾敏;刘静yN;刘毅;栗莉;裴海峰;刘佩林;王瀚;王海昌;陶凌;;Nur77在缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡中的作用及其机制的研究[J];现代生物医学进展;2012年03期

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本文编号：831120