NMDA受体拮抗剂对高铜灌注抑郁大鼠的影响机制研究

发布时间：2017-09-12 05:11

  本文关键词：NMDA受体拮抗剂对高铜灌注抑郁大鼠的影响机制研究

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【摘要】：研究目的通过建立高铜(Copper,Cu)灌注抑郁大鼠模型,采用N-甲基-D-天冬氨酸(N-mehty-D-asparticacid,NMDA)受体拮抗剂对大鼠进行干预,探讨Cu与NMDA受体的相互作用机制,为寻找抑郁症有效的药物治疗提供新的思路。研究方法4 4只雄性S D成年大鼠随机分为4组,A组为皮质酮(H yd ro c ort i s on e,C ORT)组,每天随机选择时间予CORT 20mg/kg,皮下注射给药(subcutaneous i nj e ct i on,s.c),同时接受生理盐水1m l/k g,灌胃给药(i nt r a gas t ri c adm i ni s t ra t i on,i.g)。B组为C ORT+高铜(cop pe r,C u)组,于每天同样时间段接受C ORT 20m g/k g,s.c+铜溶液(C u)7m g/k g,i.g;C组为单纯灌C u组,接受C u7m g/k g,i.g;D组为正常对照(he al t h con t rol,HC)组,接受生理盐水1m l/k g,i.g。模型建立持续21天。定期监测四组大鼠的体重、活动情况、进食量等,刺激结束后进行摄食测试、糖水偏好测试、旷场试验及Morris水迷宫等行为学测试。行为学测试结束后,将每组大鼠中的其中5只处死,取血样本和脑组织保存待测,剩余大鼠接受NMDA受体拮抗剂美金刚进行干预。药物浓度为20m g/k g,i.g,且1 4天干预结束后同样进行行为学测试,测试结束后将剩余所有大鼠处死,取血样本和脑组织保存。检测干预前后血样本的血清铜离子含量和脑组织NMDAR1表达以及谷氨酸受体离子化NMDA1受体基因(Gl ut a m at e R e c ept o r,Io n ot r opi c NM DA 1 gen e,G ri n 1)表达水平。研究结果1.经皮质酮处理的大鼠的体重随时间推移呈逐步减轻的变化趋势,尤以C ORT+C u组大鼠的体重下降明显(F=68.9 7,p=0.00 0;F=1 42.2 6,p=0.00 0;F=7 6.22,p=0.00 0)。单纯灌C u组大鼠的体重变化与HC组无显著差异。C ORT、C ORT+C u及C u组大鼠的摄食量及糖水偏好度均较H C组显著下降(F=21.94 5,p=0.000,f=52.159,p=0.000)。在旷场实验中,cort组和cort+cu组大鼠的活动距离和速度均显著低于hc组(f=4.23,p=0.000,f=5.73,p=0.002)。morris水迷宫测试中,四组大鼠从第3天起逃避潜伏期出现显著差异(f=3.453,p=0.025),cort+cu组在第3天的逃避潜伏期高于其他三组,第4、5天,cort+cu组的逃避潜伏期均高于cort组和cu组,cort组和cu组的逃避潜伏期均高于hc组(f=7.249,p=0.001;f=11.873,p=0.000),cort组、cort+cu组和cu组在探索测试的穿越平台次数显著少于hc组(f=17.526,p=0.000)。2.nmda受体拮抗剂美金刚干预前后对比发现,cort及cort+cu组大鼠干预后的摄食量显著增加(t=-2.509,p=0.046;t=-4.75,p=0.005),cort组大鼠干预后的糖水偏好度有显著增加(t=-6.959,p=0.000),cort、cort+cu以及cu组等三组大鼠干预后在旷场试验中活动总路程有显著增加(t=-3.764,p=0.009,t=-4.872,p=0.005,t=-4.915,p=0.004),cort+cu以及cu组大鼠干预后在旷场试验中平均速度有显著增加(t=-4.23,p=0.008,t=-4.635,p=0.006),cort+cu组大鼠在morris水迷宫测试的逃避潜伏期较干预前明显缩短,穿越平台次数明显增加(t=2.843,p=0.036;t=2.786,p=0.039;t=5.073,p=0.004;t=3.465,p=0.018;t=3.807,p=0.013;t=-6.5,p=0.001)。3.cort及cort+cu组大鼠的血清铜水平显著高于cu组及对照组,未发现cu组与hc组的血清铜水平存在差异(f=11.7,p=0.000)。经nmda受体拮抗剂干预后,各组大鼠的血清cu水平较干预前降低,差异有显著性(t=9.625,p=0.025;t=3.207,p=0.000;t=0.003,p=0.003;t=1.943,p=0.003)。4.cort组、cort+cu组及cu组大鼠的nmda1受体及grin1基因表达在皮质酮注射及高铜灌注后与hc组相比未存在差异(f=3.168,p=0.053;f=1.041,p=0.401)。nmda受体拮抗剂干预后,各组大鼠的nmda1受体(t=0.681,p=0.077;t=0.817,p=0.329;t=0.012,p=0.561;t=0.765,p=0.873)及grin1基因表达(t=0.565,p=0.619;t=2.388,p=0.121;t=4.339,p=0.211;t=0.476,p=0.112)较干预前亦无显著变化。研究结论1.铜离子可能加重皮质酮所致的大鼠抑郁症状;并与快感缺失等症状有关;增加铜摄入可能会加重皮质酮对大鼠认知功能的损害。2.NM D A受体拮抗剂治疗可改善抑郁大鼠出现的食欲、快感体验以及认知功能等抑郁症状。3.皮质酮注射可引起血清铜离子水平增高,N M D A受体拮抗剂治疗可降低抑郁大鼠体内升高的血清铜水平。4.NM D A受体拮抗剂干预治疗可能不影响NM D A受体蛋白及基因表达。
【关键词】：抑郁症 NMDA受体 谷氨酸 铜 美金刚
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.4
【目录】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-11
• 第一章 前言11-17
• 1.1 研究背景11-12
• 1.2 国内外研究现状12-17
• 第二章 材料与方法17-26
• 2.1 仪器与材料17-18
• 2.2 动物模型的建立18-21
• 2.3 大鼠脑组织及血样品的处理21-22
• 2.4 大鼠血清Cu测定22
• 2.5 免疫组化检测22-23
• 2.6 实时定量PCR（ Real-ti me PCR）检测23-25
• 2.7 统计学分析25-26
• 第三章 研究结果26-35
• 3.1 干预前后大鼠体重观测26-27
• 3.2 干预前后抑郁大鼠摄食测试、糖水偏好及旷场试验结果对比27-29
• 3.3 抑郁大鼠干预前后Morris水迷宫结果及对比29-32
• 3.4 血清Cu浓度测定32
• 3.5 免疫组化测定NMDAR1 表达32-33
• 3.6 大鼠海马组织Grin1 基因表达测定33-35
• 第四章 讨论35-42
• 4.1 NMDA受体拮抗剂对抑郁大鼠的体重、食欲的影响35-37
• 4.2 NMDA受体拮抗剂对抑郁大鼠的行为学、认知特征的影响37-39
• 4.3 NMDA受体拮抗剂对抑郁大鼠血清铜水平的影响39
• 4.4 NMDA受体拮抗剂对NMDA受体水平的影响39-40
• 4.5 NMDA受体拮抗剂对Grin1 基因水平的影响机制40-41
• 4.6 研究的不足41
• 4.7 研究的创新性41-42
• 第五章 结论42-43
• 参考文献43-47
• 综述47-56
• 参考文献53-56
• 附录-中英文缩略词表56-58
• 硕士在读期间发表论文58-59
• 致谢59

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本文编号：835274