海洛因成瘾大鼠背侧海马蛋白质组学分析及差异蛋白与成瘾的相关性研究

发布时间：2017-09-27 19:25

  本文关键词：海洛因成瘾大鼠背侧海马蛋白质组学分析及差异蛋白与成瘾的相关性研究

  更多相关文章： 蛋白质组学 背侧海马 自身给药 热休克蛋白70 Rho B

【摘要】：阿片类物质是指从罂粟中提取的天然阿片类生物碱以及体内外的衍生物,包括吗啡、可待因、海洛因、哌替啶等。虽然阿片类物质在临床上可用于镇痛、心源性哮喘,止泻和镇咳等,但总体来说阿片类物质不良反应多且严重,尤其是多次应用易产生耐受性和依赖性,不仅极大程度上限制了其临床应用,而且造成制毒贩毒犯罪率明显升高,肝炎、结核、艾滋病等多种传染病广泛传播,这给个人、家庭和社会带来了极大的危害,因此,探究阿片类物质成瘾的机制,寻找有效的治疗药物和作用靶标成为当务之急。阿片类物质成瘾的临床症状主要有躯体依赖和精神依赖,躯体依赖是指机体对长期使用依赖性药物所产生的一种适应状态,包括耐受性和停药后的戒断症状,精神依赖是伴随药物作用产生的满足感或欣快感,在精神上驱使用药者连续用药,产生强烈的心理渴求和强迫性用药行为。躯体依赖可用美沙酮进行脱毒治疗,而精神依赖目前仍无有效的治疗方法,因此复吸率极高,故精神依赖是药物滥用的关键原因,也是阿片成瘾机理研究的核心问题。阿片类物质躯体依赖主要和蓝斑核相关,而精神依赖主要与边缘系统有关,包括前额叶皮层,中脑腹侧被盖区,伏隔核,弓状核,杏仁核和海马等,其中海马参与环境线索的存贮和读取过程,海马功能失调与药物成瘾过程密切相关,因此成为我们的关注焦点。复吸是指成瘾患者药物戒断一段时间后,在一些相关因素刺激下渴望感受药物所带来的效应而重新恢复用药的行为。复吸是药物成瘾的重要特征,也是困扰成瘾治疗的首要问题,一般来说,患者生理脱毒后的复吸主要与以下三个因素有关,再次接触成瘾药物,再次暴露于伴药环境或线索和应激事件,其中暴露于伴药环境是诱发成瘾者或动物复吸的主要因素。药物成瘾是一种以不计后果的强迫用药为特征的异常行为,这种异常行为在反复用药后逐渐发生,并在停药后持续相当长的时间,研究表明,反复用药可改变相关脑区的基因或蛋白表达水平或类型,这些改变不但影响了神经元的功能,也影响了相关神经环路,最终导致药物成瘾的异常行为,因此我们采用蛋白质组学分析了海洛因自身给药(self-administration, SA)后背侧海马(dorsal hippocampus, DH)的蛋白表达变化,然后选取相关差异蛋白,采用大鼠海洛因自身给药模型研究DH微注射相关蛋白抑制剂是否会影响大鼠的觅药行为。目的：应用蛋白质组学分析海洛因成瘾后DH的蛋白表达变化,采用大鼠海洛因自身给药模型研究DH微注射Hsp70或ROCK抑制剂是否会影响大鼠的海洛因渴求和环境诱导的复吸。方法：1)大鼠自身给药模型(FR1)：大鼠随机分为两组,生理盐水组和海洛因组。行为学实验共进行12天,每天3h,运行程序为FR=1,前6天每次有效鼻触给予海洛因100μg/kg,后6天减为50μg/kg,每次实验达到3h或注射30次后结束,动物放回饲养笼。训练结束后24h处死大鼠,取DH做蛋白质组学及western blot分析。2)大鼠自身给药模型(PR)：实验第1-3天使用FRl程序训练动物,每天3h,第4-6天使用FR2程序训练3h,从第7天开始变更为FR5程序,每天3h,待海洛因的摄取达到稳定后(连续三天动物的给药次数波动小于10%)进入PR程序。PR程序稳定后(连续三天的药物注射次数波动小于2次)连续进行6天,每天6h,溶剂和PES/Y-27632的核团注射在PR程序稳定后开始,每天PR训练前注射。随后动物进入两周的戒断期。两周后动物放回原训练环境,观察环境诱导的复吸,测试前核团注射溶剂和PES/Y-27632。实验结束后取脑做尼氏染色,排除注射位置不正确的大鼠数据。结果：蛋白质组学鉴定出的3959个蛋白中共有421个差异蛋白,其中291个为已知蛋白。这些差异蛋白与能量代谢、氧化应激反应、蛋白降解和修饰、突触功能和信号转导等重要的生命过程密切相关。经过western blot验证,DH的Hsp70和Rho B表达在海洛因成瘾后显著上调。于DH微泵注射相应剂量的溶剂(30%DMSO)和PES15min后开始PR程序, two-way ANOVA显示,F1.85=4.8,P0.05,说明给予PES组的Break Point显著低于溶剂组,同样的,微泵注射相应剂量的溶剂和PES15min后测试环境诱导的复吸,结果显示溶剂组和给予PES组动物的有效鼻触次数无明显差异。于DH微泵注射相应剂量的溶剂(PBS)和Y-27632 30min后动物开始PR程序,两组动物的Break Point无明显差异,而微泵注射相应剂量的溶剂和Y-27632 30min后测试环境诱导的复吸,结果显示给予Y-27632组大鼠在环境诱导的复吸中其有效鼻触次数明显低于溶剂组。结论：1.海洛因自身给药可以导致大鼠DH 421个蛋白表达变化,涉及18条信号通路,与能量代谢、氧化应激反应、蛋白降解和修饰、突触功能和信号转导等重要的生命过程密切相关。2.海洛因成瘾诱导大鼠背侧海马的Hsp70和Rho B表达。3.抑制背侧海马Hsp70可以显著降低大鼠对海洛因的渴求,但不影响环境诱导的复吸。4.抑制背侧海马Rho B信号通路对大鼠的海洛因渴求无明显影响,但可显著抑制环境诱导的复吸。
【关键词】：蛋白质组学 背侧海马 自身给药 热休克蛋白70 Rho B
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.6
【目录】：

• 英文缩略词表6-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-21
• 材料与方法21-35
• 实验结果35-46
• 讨论46-57
• 结论57
• 结语57-59
• 参考文献59-72
• 附录 综述72-83
• 参考文献80-83
• 在读期间发表的文章83-84
• 致谢84

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈特高;647例海洛因成瘾住院病人临床流行病学调查[J];铁道医学;1995年05期

2 刘敏,苏同生,毕宇峰;电针戒毒对海洛因成瘾的脱瘾效能观察[J];针灸临床杂志;1997年Z1期

3 张月华,赵景凤;海洛因成瘾脱毒期窒息死亡尸检一例报道[J];中国药物依赖性杂志;2002年04期

4 谭志明;血液透析治疗海洛因成瘾5例报告[J];中国煤炭工业医学杂志;2002年06期

5 韦献良,叶峻,周燕;海洛因成瘾大白鼠脑组织超微结构变化的研究[J];广西医科大学学报;2003年06期

6 李桢,徐汝昌,赵永和,杨真,王旭,韩晓华,希尔顿;实验性海洛因成瘾所致肌病与肾损害(英文)[J];昆明医学院学报;2004年04期

7 刘秋华,黄勤,黄新,周元明,梁建平,张鉴文,许刚,李亚平;“三明治”疗法治疗海洛因成瘾4例报告[J];广西中医学院学报;2004年04期

8 韦世秀,蒙子卿,叶峻,蒋春华;不同阶段海洛因成瘾大鼠脑内单胺递质的变化[J];中国医院药学杂志;2005年05期

9 刘强,杜艺,彭莉,李宓,郑晶,余权星,邹和群;血液净化治疗海洛因成瘾的临床研究[J];中国血液净化;2005年10期

10 邵春红;江开达;李一峰;赵敏;宋立升;徐一峰;林凌;王秋颖;朱敏;周伟航;;5-羟色胺2A受体基因多态与海洛因成瘾及渴求程度的关联分析[J];中国神经精神疾病杂志;2005年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 谢小虎;周文华;;海洛因成瘾易感基因位点的基因组关联分析[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

2 黄矛;;开设校园讲座《海洛因成瘾及其医学防治》的体会[A];第五届全国药理学教学学术会议论文摘要汇编[C];2000年

3 谢文婷;唐建良;李国荣;朱婉儿;;海洛因成瘾的心理干预进展[A];浙江省医学会心身医学分会成立大会暨2006年浙江省心身医学学术年会论文汇编[C];2006年

4 劳瑞勋;;中西医结合戒治海洛因成瘾追踪随访报告[A];第四届全国中西医结合戒毒学术研讨会教材、论文摘要集[C];2000年

5 韦献良;叶峻;梁莹;李卫东;莫肖敏;;海洛因成瘾大鼠脑神经元两种死亡方式的超微结构观察[A];第十三届全国电子显微学会议论文集[C];2004年

6 邹晓波;莫湛宇;林举达;林志雄;黄秀凤;林桂梅;;血液透析结合心理疗法对海洛因成瘾的治疗[A];中国神经科学学会精神神经专业委员会成立大会暨第一届学术会议论文集[C];2004年

7 王玫;;血液透析治疗海洛因成瘾的临床观察[A];中华医院管理学会血液净化中心管理分会2004年会论文汇编[C];2004年

8 何开德;罗玲;李林坤;;血液透析治疗海洛因成瘾[A];职工医院医学理论与实践[C];1998年

9 邱平明;陈玲;王爱枫;王慧君;;神经颗粒素在海洛因成瘾戒断大鼠脑组织中的表达[A];第十届全国药物依赖性学术会议暨首届中美药物滥用和HIV/HCV共病专题研讨会论文摘要汇编[C];2008年

10 郭沈昌;成良正;温金峰;宁连才;谭家亮;徐海燕;;海洛因成瘾立体定向术后3年随访报告—附215例两次随访结果[A];第十届全国药物依赖性学术会议暨首届中美药物滥用和HIV/HCV共病专题研讨会论文摘要汇编[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前7条

1 记者 李岱娜;在尝试中创新 在钻研中进取[N];汕头日报;2010年

2 刘云涛;我国戒毒药物研究获得新进展[N];中国医药报;2008年

3 陈菲 李鹏;国家禁毒委：娱乐场所吸贩毒问题比较突出[N];新华每日电讯;2006年

4 通讯员　　冯家清　南京日报记者　　倪秀萍;美沙酮替代毒品戒毒在宁试行[N];南京日报;2006年

5 王慧峰;全国禁毒形势不容乐观[N];人民政协报;2006年

6 本报记者 郑娜 荣锋;吸毒易·戒毒苦·禁毒难[N];发展导报;2006年

7 本报记者 张润东;《禁毒法》有望年内出台[N];华夏时报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 柴尔青;海洛因成瘾的检测方法及其神经病理学特征研究[D];兰州大学;2015年

2 邱平明;海洛因成瘾戒断大鼠相关脑区差异蛋白的分离与鉴定[D];南方医科大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 秦积涛;基于脑电分析方法的海洛因成瘾者的决策障碍研究[D];兰州大学;2016年

2 魏志杰;海洛因成瘾人群的注意偏向及其脑电非线性特征研究[D];兰州大学;2016年

3 耿帆;海洛因成瘾大鼠背侧海马蛋白质组学分析及差异蛋白与成瘾的相关性研究[D];南京医科大学;2014年

4 王爱花;海洛因成瘾戒断者情绪障碍中唤醒度异常的功能磁共振研究[D];汕头大学;2009年

5 吴晓雄;登仁桥社区居民对海洛因成瘾相关知识、态度的调查[D];中南大学;2012年

6 罗孝美;硫化氢和一氧化氮对海洛因成瘾大鼠学习记忆的影响[D];遵义医学院;2009年

7 周燕;海洛因成瘾大鼠中脑腹侧被盖区和伏隔核损害的研究[D];广西医科大学;2005年

8 韦献良;海洛因成瘾大鼠脑组织超微结构和GFAP表达的变化[D];广西医科大学;2004年

9 林彬;基于fMRI和ERP技术探索冲动性决策障碍在海洛因成瘾机制中的作用[D];安徽医科大学;2012年

10 邱思友;基于功能磁共振成像的肥胖和海洛因成瘾神经生理机制研究[D];西安电子科技大学;2014年

，

本文编号：931512