APPK724M新发突变导致中国家庭早发型阿尔茨海默病研究

发布时间：2017-09-28 20:33

  本文关键词：APPK724M新发突变导致中国家庭早发型阿尔茨海默病研究

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【摘要】：目的：阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是老年人群常见的中枢神经系统退行性疾病。尽管中国拥有全世界数量最多的老年人口和痴呆人群,国内鲜有关于家族性AD基因突变的报道。我们在前期工作中发现了一个早发型家族性AD(early-onset familial AD, EOFAD)家系携带有新的APP基因突变：APPK724M。为了证实该EOFAD的致病基因及其机制,本研究对该家系成员三个AD致病基因的突变位点及风险因子APOE等进行了全面、系统分析,并对该家系APPK724M基因突变的致病机理进行了探讨。 方法：收集AD患者及其直系亲属和无关人群对照组外周血DNA样本,针对PSEN-1和PSEN-2基因的编码外显子和APP外显子16、17设计引物,PCR扩增基因外显子后进行DNA测序和序列分析；针对APOE基因编码外显子设计引物,PCR扩增基因外显子后测序鉴定APOE基因型。同时,构建APPK724M突变基因真核表达载体,使用脂质体法转染HEK293细胞,Western Blot、ELISA检测APP表达和代谢情况。 结果：临床样本AD致病基因的测序结果表明,该家系中接受检测的痴呆症患者皆携带APPK724M突变,而PSEN1/2基因未见编码突变,已检测的该家系的健康个体及对照组成员标本均未见相应的APP基因突变。先证者APOE基因型为3/4,而其他成员皆为3/3。Western Blot结果显示野生型与突变型APP表达水平接近；ELISA结果显示,与野生型APP相比,K724M突变型APP在细胞内代谢后能产生更多的Aβ42,同时Aβ42/40比例增加。 结论：首次报道并确认APPK724M突变是导致一个中国家系早发型FAD的致病因子,APPK724M突变影响APP在细胞内的代谢,产生更高水平的Aβ42可能是该家系AD患者的发病原因。
【关键词】：早发型家族性阿尔茨海默病 基因突变 β-淀粉样肽 淀粉样前体蛋白
【学位授予单位】：北京交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 致谢5-6
• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 1. 引言10-15
• 1.1 研究背景10-12
• 1.2 FAD研究现状12-14
• 1.3 研究目的和意义14
• 1.4 实验设计和流程14-15
• 2. 材料和方法15-29
• 2.1 材料15-18
• 2.1.1 质粒载体15
• 2.1.2 细胞株与细菌菌株15
• 2.1.3 主要试剂盒及耗材15
• 2.1.4 主要工具酶及试剂15-16
• 2.1.5 主要试剂的配制16-17
• 2.1.6 主要仪器17-18
• 2.2 方法18-29
• 2.2.1 AD外周血样本的收集及基因组DNA的提取18-19
• 2.2.2 PSEN-1、PSEN-2、APP致病基因扩增引物的设计合成19
• 2.2.3 致病基因的筛查19
• 2.2.4 APP695野生型及突变型真核表达质粒的提取及鉴定19-24
• 2.2.5 APOE的PCR扩增和纯化测序24-25
• 2.2.6 Western Blot及ELISA分析APP在细胞内的表达及代谢25-29
• 3. 结果29-37
• 3.1 FAD致病基因及风险因子测序分析29-33
• 3.1.1 FAD家系成员信息29-30
• 3.1.2 FAD致病基因测序30
• 3.1.3 AD风险因子测序情况30-32
• 3.1.4 FAD家系成员AD致病基因和风险因子核酸分析总结32
• 3.1.5 对照组APP基因外显子测序分析32-33
• 3.2 pcDNA3.1(-)-APP695野生型及突变型的鉴定、制备33-35
• 3.3 Western Blot、ELISA分析APP细胞内的细胞表达及代谢35-37
• 3.3.1 Western Blot分析APP的细胞表达水平35
• 3.3.2 ELISA分析HEK293细胞胞内及上清中的Aβ40、Aβ4235-37
• 4. 讨论37-39
• 5. 结论39-40
• 参考文献40-42
• 附录A42-43
• 作者简历及攻读硕士学位期间取得的研究成果43-45
• 学位论文数据集45

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本文编号：937916