淀粉样前体蛋白β位点单链抗体抑制β淀粉样肽的分泌

发布时间：2017-09-30 14:02

  本文关键词：淀粉样前体蛋白β位点单链抗体抑制β淀粉样肽的分泌

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【摘要】：目的观察淀粉样前体蛋白(APP)β位点单链抗体(sc Fv)对APP的α和β代谢的影响,为其作为APPβ分泌酶特异抑制剂奠定基础。方法以APPβ位点sc Fv 2H10基因序列为模板,通过PCR引入Igκ轻链信号序列和myc标签,与真核表达载体pc DNA3.1hyg(~+)相连,转染过表达人瑞典突变型淀粉样前体蛋白695(APP695)的CHO细胞株(APP695sw/CHO),经潮霉素B筛选出稳定转染细胞株,用夹心ELISA检测稳定转染细胞株培养上清中Aβ40和分泌型APPα(s APPα)的含量,并分别比较两者的变化。结果经PCR、酶切和测序鉴定证明,获得引入Igκ分泌信号和myc标签的APPβ位点sc Fv基因片段,且与真核表达载体正确相连。转染APP695sw/CHO细胞后,经潮霉素B筛选得到稳定转染株;Western blot法可检测到目的蛋白表达,ELISA结果显示,与对照相比,稳定转染细胞培养上清Aβ40分泌量约下降30.4%、s APPα水平上升23.1%。结论 APPβ位点sc Fv在抑制Aβ分泌的同时还可能有利于APP的α代谢,可作为β分泌酶高特异性抑制剂。
【作者单位】： 武汉市医学科学研究所;武汉大学人民医院儿科;
【关键词】： 淀粉样前体蛋白 β位点 单链抗体 β淀粉样肽 α代谢 阿尔茨海默病
【基金】：国家自然科学基金(30500085,81000094) 湖北省自然科学基金(2009CDB336) 武汉市卫计委课题(WX09B13,WX14C71)
【分类号】：R749.16
【正文快照】： 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)最主要的病理改变包括脑组织细胞外淀粉样斑块形成和神经细胞内神经原纤维缠结,而一种名为β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)的小分子多肽过量产生、聚集和沉积,是形成淀粉样变的重要早期事件,Aβ可通过自组装形成脑组织中可溶性寡聚

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本文编号：948569