荧光素酶基因标记的舌鳞癌细胞构建及其裸鼠活体成像的观察研究

发布时间：2016-10-20 11:35

本文关键词：荧光素酶基因标记的舌鳞癌细胞构建及其裸鼠活体成像的观察研究，由笔耕文化传播整理发布。

《天津医科大学》 2014年

荧光素酶基因标记的舌鳞癌细胞构建及其裸鼠活体成像的观察研究

王通

【摘要】：研究目的：1、通过脂质体转染法构建稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的舌鳞癌单克隆细胞株Tca83-GFP-luc,证实其生长特性及细胞活性与母细胞系Tca83无显著差异,为后期裸鼠活体生物发光成像提供细胞学基础。 2、建立可重复性、稳定性的Tca83-GFP-luc舌鳞癌裸鼠舌体原位及皮下异位移植瘤模型,应用小动物活体成像技术无创、实时和连续观察舌鳞癌动物模型的生长、转移,为肿瘤动物模型的推广应用、临床舌癌的预防及治疗提供参考依据。研究方法：1、采用脂质体2000介导的转染方法,将带有荧光素酶基因和GFP基因的质粒转染到人舌鳞癌Tca83细胞株,G418筛选后获得稳定表达荧光素酶基因的单克隆细胞(Tca83-GFP-luc),以MTT法、流式细胞技术以及Westernblot检测Tca83-GFP-luc细胞的生物学特性,用流式细胞仪及活体成像仪体外检测’Tca83-GFP-luc细胞中荧光素酶的表达水平。 2、裸鼠舌癌皮下异位模型的建立：20只裸鼠随机分为两组,实验组15只,于后肢皮下注射Tca83-GFP-luc细胞悬液,对照组5只,于后肢皮下注射Tca83细胞悬液,从而建立舌鳞癌皮下异位移植瘤模型,以活体成像仪连续观察裸鼠后肢皮下4w,记录肿瘤生物发光影像,检测荧光信号值,测定肿瘤大小,统计肿瘤大小与荧光信号值的关系。4w后处死实验裸鼠,离体观察移植瘤组织切片。 3、裸鼠舌癌正位模型的建立：20只裸鼠随机分为两组,实验组15只,于左侧舌缘注射Tca83-GFP-luc细胞悬液,对照组5只,于左侧舌缘注射Tca83细胞悬液,建立舌鳞癌正位移植瘤模型,以活体成像仪连续观察裸鼠舌体4w,记录肿瘤发光影像,检测荧光信号值,测定肿瘤大小,统计肿瘤大小与荧光信号值的关系。4w后处死实验裸鼠,离体观察移植瘤组织切片。研究结果：1、通过脂质体2000介导的转染法,荧光素酶基因和绿色荧光蛋白基因可被转染入Tca83细胞,经体外G418筛选,可获得荧光素酶基因稳定高效表达的单克隆细胞Tca83-GFP-luc, MTT法、流式细胞技术以及Westernblot检测Tca83-GFP-luc细胞生物学特性与Tca83细胞无显著差异。用流式细胞仪对获得的Tca83-GFP-luc细胞进行检测,其荧光素酶表达率达96%,以活体成像仪检测Tca83-GFP-luc细胞体外发光强度与细胞浓度数量成线性关系(r2=0.9510，P0.01)。 2、11只异位模型实验组裸鼠在接种后7-11d出现后肢皮下肿瘤,成瘤率73.33%,4只异位模型对照组裸鼠在接种后7-9d出现后肢皮下肿瘤,成瘤率80%,13只正位模型实验组裸鼠在接种后第6-12d相继出现舌部肿瘤,成瘤率86.67%,3只正位模型对照组裸鼠在接种后第6-10d相继出现舌部肿瘤,成瘤率60%。 3、利用活体成像仪连续观察异位模型实验组裸鼠4w,第1w可检测到肿瘤细胞的生物发光信号,随着时间延长,荧光信号逐渐增强,统计分析肿瘤体积大小与荧光信号呈线性相关(r2=0.9872,P0.01)。 4、利用活体成像仪连续观察正位实验组裸鼠4w,第1w可检测到肿瘤细胞的生物发光信号,随着时间延长,荧光信号逐渐增强,统计分析肿瘤体积大小与荧光信号呈线性相关(r2=0.9809,P0.01)。 5、荧光显微镜下观察舌体正位及皮下异位移植瘤组织切片,肿瘤细胞胞浆内可见GFP发出的绿色荧光。研究结论：1、利用脂质体转染法可稳定转染Tca83细胞,经G418梯度筛选成功建立稳定表达荧光素酶的舌鳞癌单克隆细胞株Tca83-GFP-luc,该单克隆细胞可应用于小动物活体生物发光成像。 2、通过建立裸鼠舌癌异位移植瘤模型,并利用活体生物发光成像系统观察模型发光情况,证实荧光素酶表达活性随肿瘤体积的增长而增强。通过建立裸鼠舌癌正位移植瘤模型,并利用活体生物发光成像系统直观、连续、敏感地检测肿瘤生长及转移情况,为研究在体内环境中舌癌的变化发展规律提供了重要的实验手段,为下一步监测裸鼠舌癌移植瘤对药物作用的变化情况,从而为分析药物对肿瘤的治疗效果提供理想的实验动物检测平台。因此,采用活体动物成像系统构建的带荧光素酶基因的裸鼠舌癌移植瘤模型是拓展舌癌体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型。

【关键词】：
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.86
【目录】：

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