牛乳铁蛋白对伴放线放线杆菌内毒素抑制作用的研究

发布时间：2020-11-21 18:02

　　 牙周炎是由牙周致病菌引起的常见口腔疾病，导致牙齿支持组织（牙龈、牙周膜、牙槽骨和牙骨质）的破坏——牙周袋形成和炎症进行性的附着丧失和牙槽骨吸收。牙周炎分为慢性牙周炎（chronic periodontitis,CP）、侵袭性牙周炎（aggressive periodontitis, AgP）、反映全身疾病的牙周炎（periodontitis asmanifestation of systemic diseases）等多种类型。其中侵袭性牙周炎有家族聚集性，病情进展迅速，常导致牙槽骨的迅速吸收破坏，早期出现牙齿松动和移位，临床观察常见患者的牙周组织破坏程度与局部刺激物的量不成正比。大量研究证实，侵袭性牙周炎最主要的致病菌是伴放线放线杆菌（Actinobacillusactinomycetemcomitans,Aa），患者的龈下菌斑中分离出伴放线放线杆菌的阳性率可高达90%~100%。 伴放线放线杆菌是革兰氏阴性短杆菌，可产生许多毒性因子，降低宿主抵抗力，导致牙槽骨吸收，牙周组织破坏，促使附着丧失，形成牙周袋。内毒素是伴放线放线杆菌的细胞壁组分，对牙周组织有很强的抗原性和毒性，能通过诱导宿主细胞产生和释放促炎症细胞因子而导致炎症性的骨丧失，是牙周病非常重要的致病因子。 由于侵袭性牙周炎患者存在与菌斑堆积情况不相符的牙周组织破坏，不少学者报告，单纯的刮治术不能消除侵入到牙周组织中的伴放线放线杆菌,残存的微生物容易重新定植于牙面，使病变复发。因此，临床上主张全身和局部应用抗生素作为机械治疗的辅助疗法。目前治疗侵袭性牙周炎常用的抗生素药物易产生多种不良反应。并且近年来由于抗生素的滥用而导致的细菌耐药性的产生，日益威胁着人们身体健康，因此越来越多的学者致力于研究抑制牙周病原菌的新型药物。 乳铁蛋白（Lactoferrin, Lf）是哺乳动物体内一种分布广、功能多的铁结合糖蛋白，除了可作为人体营养来源，补充铁和氨基酸，还具有多种生物学功能。大量研究证实乳铁蛋白对多种致病菌具有抑制作用，有广谱性，且有良好的生物安全性，无毒副作用，长期使用也不会使细菌产生耐药性。 目的:通过体外观察牛乳铁蛋白对伴放线放线杆菌生长及内毒素产生的抑制作用，初步探讨牛乳铁蛋白对伴放线放线杆菌及其产生内毒素的抑制作用机制，为其作为牙周炎临床抗菌药物提供理论依据。 方法:采用液体二倍稀释法，观察牛乳铁蛋白在体外厌氧环境下对伴放线放线杆菌的抑制作用，并测定最小抑菌浓度（minimal inhibitionconcentration,MIC）。采用显色基质鲎实验法检测不同浓度牛乳铁蛋白（160mg/ml、80mg/ml、40mg/ml、20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml）作用下的伴放线放线杆菌菌液中的内毒素量，单纯细菌组作阳性对照，并将所得数据通过SPSS统计软件进行分析。 结果:牛乳铁蛋白对伴放线放线杆菌的最小抑菌浓度（MIC）为5mg/ml，在此浓度下细菌的生长明显受到抑制。与对照组相比，实验组内毒素含量明显减少（P0.05）。各实验组间相比，内毒素含量有统计学差异（P0.05），浓度越高，内毒素含量越低。 结论:牛乳铁蛋白能有效地抑制伴放线放线杆菌的生长，同时对伴放线放线杆菌主要的致病因子——内毒素有良好的抑制作用。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R781.42
【部分图文】：

将复苏的菌株在 BHI 固体培养基中于 37℃恒温箱培养 48h，革兰涂片染色鉴定为 Aa 纯培养物。当牛乳铁蛋白浓度为 5mg/ml 时，革兰染色未发现细菌，肉眼观察培养后的液体培养基澄清无浑浊，无沉淀，认为无细菌生长（见图3.1A），牛乳铁蛋白浓度为 2.5mg/ml 时，液体培养基浑浊，不澄清，认为有细菌生长（见图 3.1B）。而且将液体培养物转接种于 BHI 固体培养基中于 37℃恒温箱中厌氧培养 48h 后，也是在乳铁蛋白最低浓度为 5mg/ml 时无细菌生长（图 3.2），说明Aa 数量为 1 x 107CFU/ml 时，牛乳铁蛋白对 Aa 的 MIC 为 5mg/ml。（见表 3.1）

不同浓度bLf对Aa生长的影响

表 4.1 鲎试剂标准曲线Tab4.1 TAL reagent on endotoxin detection value of standard solution内毒素浓度 测量值 1 测量值 2 测量值 3 平均值1 1.393 1.372 1.381 1.3820.5 0.673 0.665 0.669 0.6690.25 0.352 0.359 0.348 0.3530.1 0.135 0.140 0.142 0.1390 0.028 0.028 0.028 0.028
【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 张迪亚;李盛来;陈莉丽;;伴放线放线杆菌与牙周病相关细胞凋亡关系的研究[J];国际口腔医学杂志;2007年02期

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1 王中强;天然乳铁蛋白和重组乳铁蛋白的体内、体外抗菌效果及机理研究[D];浙江大学;2004年

本文编号：2893393