云南白药对人牙髓干细胞成牙本质向分化影响的动物实验研究

发布时间：2016-10-25 18:44

本文关键词：云南白药对人牙髓干细胞成牙本质向分化影响的动物实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

《昆明医科大学》 2015年

云南白药对人牙髓干细胞成牙本质向分化影响的动物实验研究

殷欣桐

【摘要】：[目的]体外分离培养获得人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs),与云南白药复合于HA/TCP (hydroxyapatite/tricalcium phosphate)支架上,将复合体植入裸鼠体内,研究云南白药对hDPSCs在体内成牙本质向分化的影响,为云南白药应用于牙髓组织修复提供实验依据。[方法]体外分离培养人牙髓细胞(human dental pulp cells, hDPCs),取原代或第1代hDPCs,单克隆化培养获得hDPSCs,通过流式细胞仪检测hDPSCs表面特异性抗原标志物并进行成骨及成脂诱导鉴定其干细胞特性。将hDPSCs与HA/TCP进行体外复合培养后分为3组,云南白药组加入含10μg/ml云南白药的10%FBS的α-MEM培养液,阳性对照组加入含100ng/ml的重组人骨形成蛋白-2(Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-2, rhBMP-2)的10%FBS的α-MEM培养液,空白对照组加入含10%FBS的α-MEM培养液。体外复合培养1周后植入裸鼠背部皮下,8周后取出复合物,采用HE染色观察组织学形态的变化,免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)检测成牙本质相关的特异性蛋白骨钙素(Osteocalcin,OC)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)的蛋白表达情况,qRT-PCR检测成牙本质相关的特异性蛋白OC、DSPP的基因表达情况,观察动物体内条件下云南白药对HA/TCP支架上培养的hDPSCs向成牙本质分化的影响,并对实验数据进行统计学分析。[结果]1、单克隆纯化培养获得的hDPSCs,经流式细胞仪检测细胞表面标志物STRO-1、CD146、CD29、CD105呈阳性表达,CD34, CD45呈阴性表达；经成骨诱导有矿化结节形成,成脂诱导有脂滴形成。2、植入动物体内的复合物经HE染色组织学观察可见支架表面及孔隙内有新生基质样物质、成牙本质样细胞和微血管形成,云南白药组与阳性对照组均较空白对照组明显；未见牙髓牙本质复合体形成；支架有部分的降解。3、免疫组织化学结果显示云南白药组与阳性对照组OC、DSPP为阳性表达,空白对照组为阴性表达；OC的表达量云南白药组低于阳性对照组,差异有统计学意义(P0.05),云南白药组与阳性对照组均高于空白对照组,差异有统计学意义(P0.05); DSPP的表达量云南白药组与阳性对照组均高于空白对照组,差异有统计学意义(P0.05),云南白药组与阳性对照组之间无明显差异(P0.05)。4、qRT-PCR结果显示：OC的表达量云南白药组高于空白对照组与阳性对照组,差异有统计学意义(P0.05); DSPP的表达量云南白药组与阳性对照组均高于空白对照组,差异有统计学意义(P0.05),云南白药组与阳性对照组之间无明显差异(P0.05)。[结论]1、本实验通过克隆化培养所获得细胞为hDPSCs,具有成骨、成脂向分化能力。2、10μg/ml的云南白药对植入动物体内的hDPSCs-HA/TCP复合物有诱导hDPSCs成牙本质向分化的作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R781
【目录】：

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