HEMA对人牙髓细胞、成牙本质样细胞中MMPs表达的影响与调控

发布时间：2016-10-28 17:11

  本文关键词：HEMA对人牙髓细胞、成牙本质样细胞中MMPs表达的影响与调控，，由笔耕文化传播整理发布。

《昆明医科大学》 2015年

HEMA对人牙髓细胞、成牙本质样细胞中MMPs表达的影响与调控

孙素  

【摘要】：HEMA是牙本质粘接系统中重要的、分子量最小的亲水性单体,通过牙本质分子筛特性易于渗入HL内部,介导亲水性牙本质胶原与疏水性树脂材料结合。使用含HEMA的全酸蚀粘接系统时,其HEMA可渗入酸蚀后的脱矿牙本质中,防止胶原纤维塌陷,客观上维护了粘接界面的稳定,在生物机械力学方面具有较大的优势。但是,位于粘接界面以下的牙髓牙本质复合体具有的特殊结构,即近髓端的牙本质小管存在的牙髓神经末梢易受粘接单体刺激。混合层内的粘接剂长期与牙本质密切接触,其中的未聚合单体可通过牙本质小管渗透到牙髓腔,接触髓腔表层的成牙本质细胞层及深层的牙髓细胞。此外,残余单体的析出不仅降低了修复材料的机械性能,且易对材料生物相容性产生不良影响。目前,针对牙本质粘接单体HEMA对人牙髓细胞及成牙本质样细胞中MMPs表达的影响鲜见报道。因此,本研究选取牙本质粘接系统中常用的基质单体HEMA,作用于人牙髓细胞和由牙髓细胞定向诱导分化的成牙本质样细胞,检测上述细胞中MMP-2、-9的表达,为树脂材料与牙髓牙本质复合体中MMPs之间的相互关系提供实验依据,为寻求可靠、有效地防止牙本质粘接界面退变,提高粘接耐久性的方法及牙髓组织的修复再生研究奠定基础。目的：研究牙本质粘接单体HEMA对人牙髓细胞、成牙本质样细胞中MMP-2、-9表达调控的影响。方法：组织块法体外原代培养获得人牙髓细胞,以含不同浓度HEMA的DMEM培养基与第3-5代人牙髓细胞共同培养,MTT检测HEMA作用于牙髓细胞24、48和72 h的增殖情况,通过倒置荧光显微镜分析观察经不同浓度的HEMA处理48 h后细胞形态变化；然后,Transwell检测在非毒性条件下以100.400 μg/ml的HEMA处理牙髓细胞48 h后,观察其迁移数量,按同样处理方法,Western Blot检测牙髓细胞中MMP-2、-9的定量表达；最后,将牙髓细胞经诱导分化液培养3-4周, RT-PCR检测DSPP、BSP、ALP的基因表达情况,牙髓细胞成功诱导分化为成牙本质样细胞后,利用明胶酶谱法检测不同浓度HEMA对成牙本质样细胞中MMP-2、-9活性表达的影响。结果：HEMA在体外一定程度上抑制牙髓细胞的增殖,并呈时间浓度依赖性,24 h组的细胞活力值均显著高于48 h和72 h组,不同时间点的细胞活力值均明显低于各自空白对照(P0.05)；牙髓细胞经HEMA处理48 h后,空白对照组细胞生长状态良好,随着浓度增加,细胞密度明显减低,生长受到抑制,浓度到800 μg/ml时,细胞开始变为圆形,有凋亡迹象,出现细胞碎片,1500μg/ml时可见大量细胞死亡,数目稀少,出现严重变形；含100、400μg/ml HEMA的DMEM培养基作用于牙髓细胞后,与空白对照组相比,迁移细胞数目明显减少(P0.05)；同时通过定量分析,随HEMA浓度增加,与空白对照组相比,MMP-2、-9表达量明显降低；牙髓细胞成功诱导分化为成牙本质样细胞,HEMA对其中MMP-2、-9的活性具有抑制作用,孵育24 h后呈剂量依赖性抑制,其中浓度为10%HEMA呈现较强的抑制作用,但MMP-2的酶原仍未完全被抑制,采用线性回归分析HEMA对MMP-2及MMP-9的抑制作用,决定系数为r2=0.921(p0.05),差异具有统计学意义,MMP-2、-9与HEMA之间具有较好的拟合效果。结论：本研究针对HEMA对牙髓牙本质复合体中MMPs活性的抑制作用表现为两方面的临床意义：(1)牙髓细胞、成牙本质细胞与牙本质具有同源性MMPs,HEMA对其中MMPs活性的抑制,可能会保护牙本质粘接操作过程中或粘接术后I型胶原的降解,客观上维护了树脂牙本质粘接界面的稳定,具有提高牙本质粘接耐久性的潜能；(2)对牙髓细胞中MMPs表达抑制的同时,限制了牙髓细胞向成牙本质细胞的迁移,进而影响了修复性牙本质的形成。因此,含HEMA的牙本质粘接系统在临床应用中是一把双刃剑,维持粘接界面稳定性的同时又影响了修复性牙本质的形成。

【关键词】：
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R783
【目录】：

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