上皮间质转化在大鼠舌黏膜创伤愈合过程中的作用及意义
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《安徽医科大学》 2015年
上皮间质转化在大鼠舌黏膜创伤愈合过程中的作用及意义
孔苗苗
【摘要】:背景与目的:口腔是人体摄食的重要通道,口腔黏膜是口腔内的一层湿润衬里,具有屏障保护功能及感觉功能。口内黏膜损伤既有因颌面部位置暴露导致外伤频发诱发的口内黏膜损伤,亦有病因尚不明确的口腔溃疡。不论损伤原因为何,口腔黏膜的损伤都会影响人类咀嚼、吞咽、语言活动,对患者生活、社交甚至心理都会产生严重影响。临床上为此就诊的病人也屡见不鲜。然而,目前临床常用的促黏膜愈合药物主要以抗感染药物为主,少见真正的促愈合药物。因此,寻找一种有效的、安全的、便捷的疗法促黏膜愈合,会为患者的生活质量带来极大的提高。越来越多的研究阐明EMT与皮肤创伤愈合的关系密切,但在口腔黏膜创伤愈合方面的作用却需要进一步探索。上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)过程涉及多种信号分子、信号转导通路及转录因子,一旦黏膜愈合与EMT的关系被进一步揭示,将为促黏膜愈合的研究提供新的思路及更多切入点。转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是在诱导上皮间质转化方面研究最多的一种生长因子,本实验设计观察大鼠舌黏膜创伤过程中的EMT现象,并初步探讨TGF-β1对大鼠舌黏膜创伤愈合及体外培养口腔黏膜上皮细胞的作用及其与EMT的关系。方法:实验一:取7-8周龄Wistar大鼠,于舌背部黏膜处作一直径为3mm的圆形缺损模型,分别于术后0d,1d,2d,3d,4d及创伤完全愈合的第10d处死,HE染色观察黏膜愈合过程,同时采用免疫组织荧光法检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad),波形蛋白(Vimentin)和成纤维细胞特异性蛋白-1(Fibroblast specific proteins,FSP1)在舌黏膜创伤愈合过程中的表达。实验二:动物模型制备同上,术后创伤局部给药,大鼠随机分为TGF-β1凝胶组,空白凝胶组,空白对照组。术后0d,2d,4d,6d,8d从每组大鼠中随机选择8只处死,分析比较各组间伤口愈合率差异,间接免疫荧光法观测上述EMT相关蛋白。体外培养人类口腔永生化上皮细胞,划痕实验模拟体外创伤观察比较TGF-β1对划痕愈合速度的影响。结果:实验一:与0d、1d相比,术后2d-4d大鼠舌黏膜创伤边缘E-cad表达减少,而间质细胞特异蛋白Vimentin,FSP1开始在上皮基底层表达。术后第10d舌黏膜创伤完全愈合,E-cad表达量与0d相近,上皮基底层仍可见少量Vimentin,FSP1表达。实验二:术后第4d各组间愈合情况无差异;术后第8d实验组TGF-β1凝胶组愈合快于凝胶组和空白对照组(P0.05);实验组与对照组各时间点,创伤边缘区上皮基底层内表达间质细胞表型Vimentin和FSP1细胞数目未见明显差别;细胞划痕实验可见TGF-β1刺激后的HIOEC细胞形态出现间质样改变,与空白组比较,划痕实验中愈合速度在TGF-β1组更快,其中TGF-β1组在96h已基本愈合。结论:大鼠舌背部黏膜创伤愈合过程中发生了EMT现象;TGF-β1能够使体外培养的上皮细胞迁移能力增强,对大鼠舌黏膜创伤愈合有促进作用,然而其作用是否与EMT的发生有关需要进一步研究证明。
【关键词】:
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R781.57
【目录】:
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