抗牙龈卟啉单胞菌卵黄免疫球蛋白的制备、纯化和生物学功能鉴定

发布时间：2016-11-17 18:09

  本文关键词：抗牙龈卟啉单胞菌卵黄免疫球蛋白的制备、纯化和生物学功能鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

《安徽医科大学》 2015年

抗牙龈卟啉单胞菌卵黄免疫球蛋白的制备、纯化和生物学功能鉴定

董瑶  

【摘要】：目的制备特异性抗牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g i n g i v a l s)的鸡卵黄免疫球蛋白(I m m u n o g l o b u l i n o f Yo l k,I g Y),用两步硫铵沉淀法纯化总Ig Y,并鉴定和检测该卵黄抗体的生物学性能。方法厌氧培养P.gingivals,将甲醛灭活的P.gingivals经翅膀下浅层肌肉免疫150天龄罗曼母鸡3次,每次间隔10d。取鸡蛋用两步硫酸铵沉淀法提取Ig Y,BCA法测定蛋白质含量,酶联免疫吸附(enzyme-linked i m m u n o s o r b e n t a s s a y,E L L S A)检测纯化后I g Y特异性和抗体效价变化,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Westernblotting)分析。观察抗Pg-Ig Y抑制红细胞凝集。结果经3次免疫后,Pg-Ig Y抗体滴度最高可达25600,纯化后每个鸡蛋可得约70mg总Ig Y,经SDS-PAGE分析,纯化的Ig Y有1条主要蛋白带,相对分子质量(Mr)为180KDa,纯度为65%,Western blotting分析发现该Ig Y抗体可以识别抗原P.gingivals。1mg/ml Pg-Ig Y可以有效抑制P.g i n g i v a l s生长。每孔3.1 2 5 u g P g-I g Y可以有效抑制P.g i n g i v a l s的红细胞凝集活性。结论本研究得到的Ig Y产量和纯度高,特异性强,在体外能够特异性地结合P.gingivals,能够有效抑制P.gingivals的红细胞凝集活性。

【关键词】：
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R780.2
【目录】：

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本文编号：179254