30a对炎性环境下成骨细胞生物学活性的影响研究

发布时间：2016-11-19 20:00

  本文关键词：miR-23a和miR-30a对炎性环境下成骨细胞生物学活性的影响研究，由笔耕文化传播整理发布。

《第四军医大学》 2013年

miR-23a和miR-30a对炎性环境下成骨细胞生物学活性的影响研究

杨博  

【摘要】：牙周炎是危害最广泛的慢性炎性骨吸收性疾病。目前，临床上治疗牙周病的常用方法是基础治疗、药物治疗及手术治疗等，但均难以获得理想的牙周骨组织再生修复。骨代谢平衡是由成骨细胞和破骨细胞协同完成的。在炎性环境下，成骨细胞功能受抑是骨代谢失衡的关键环节。有大量研究证实炎症因子可通过不同信号通路调控成骨细胞分化，而miRNA的发现使研究目光着眼于转录后水平的调控。miRNA是一类进化上高度保守的长度约22nt的内源性小分子RNA，参与转录后水平的基因调控。它与很多生命过程和某些疾病的发生发展均有紧密联系。 目前研究认为某些miRNA的表达改变与牙周炎的发生相关。此外，成骨细胞的分化过程也与miRNA有关。然而到目前为止，国内外学者的研究只是停留于发现和报道参与调控牙周炎疾病发生发展的特定miRNA分子群；以及调控骨分化成熟的特定miRNA分子群。但对共同调节着牙周炎和骨分化的分子：miR-23a和miR-30a，以及它们对炎性微环境下成骨细胞生物学功能的调控作用和对牙周炎性骨缺失发生机制的研究尚未见报道。基于以上研究背景，本研究通过建立大鼠牙周炎动物模型及LPS刺激成骨细胞模拟体外炎性微环境，，探讨在炎性环境中，miR-23a和miR-30a对骨吸收和成骨细胞功能的影响。继而通过体外干预miR-23a和miR-30a的表达水平，我们检测了它们在正常和炎症环境下对成骨细胞的成骨能力和炎症因子受体表达的影响。对这些分子的研究，有助于更加深入的了解牙周炎性骨缺失的分子机制，为临床治疗牙周炎骨缺失提供新的策略。 研究目的 （1）观察研究大鼠牙周炎模型炎性牙龈、骨组织中miR-23a、-30a的表达改变，并模拟体外炎性微环境，观察炎性环境下牙周膜细胞、成骨细胞内miR-23a、-30a的表达情况。 （2）探讨miR-23a、-30a对成骨细胞的分化及细胞炎性因子受体表达的影响。 （3）探讨在炎性环境下，改变miR-23a、-30a的表达对成骨细胞的分化及细胞表面炎性因子受体表达的影响。 研究方法 （1）采用金属丝结扎法建立大鼠牙周炎动物模型，结扎21天后处死动物收集结扎侧和对照侧牙龈及牙槽骨组织；以1μg/ml LPS刺激牙周膜细胞和成骨细胞以模拟炎性环境，利用Real-time PCR检测组织、细胞内miR-23a、-30a的表达。 （2）通过体外转染miR-23a、-30a的模拟物和抑制物，实现miR-23a、-30a的过表达和低表达。用ALP染色、Real-time PCR检测成骨细胞分化能力和炎性因子的表达水平。 （3）在存在LPS的环境下，体外抑制miR-23a、-30a的表达，Real-time PCR检测miR-23a、-30a对成骨相关基因和炎性因子的表达水平的影响。 实验结果 （1）大鼠牙周炎牙龈组织、牙槽骨组织中miR-23a和miR-30a的表达水平明显高于正常对照侧。牙周膜细胞、成骨细胞经1μg/mL LPS刺激24h后，miR-23a和miR-30a的表达水平均较对照组明显增高，差异有统计学意义（P0.05）。 （2）过表达miR-23a和miR-30a后，ALP染色、Real-time PCR检测成骨相关基因表达下降而炎性因子的表达升高。相反，抑制miR-23a和miR-30a的表达后，ALP染色、Real-time PCR检测成骨相关基因表达上升而炎性因子的表达下降。 （3） LPS刺激成骨细胞后，成骨分化能力受抑制而炎性因子表达升高。在LPS刺激环境下，抑制miR-23a和miR-30a的表达，矿化基因表达上升、炎性因子表达下降。 结论 （1） miR-23a和miR-30a参与调控炎性微环境下骨代谢和成骨细胞的生物学活性。 （2） miR-23a和miR-30a抑制成骨细胞骨向分化，促进炎性因子的表达。 （3）在炎性环境下，抑制miR-23a和miR-30a的表达，可恢复成骨细胞分化能力、抑制炎性因子的表达。

【关键词】：
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R781.42
【目录】：

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