血小板裂解液（platelet lysate，PL）对牙源性间充质干细胞的生物学影响

发布时间：2016-12-04 14:26

  本文关键词：血小板裂解液（platelet lysate，PL）对牙源性间充质干细胞的生物学影响，由笔耕文化传播整理发布。

《第四军医大学》 2012年

血小板裂解液（platelet lysate，PL）对牙源性间充质干细胞的生物学影响

陈博  

【摘要】：血小板裂解液（platelet lysate，PL）是自体或异体血小板富集物经细胞裂解后的产物，已经被诸多研究推荐作为胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）的替代品，应用于间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）的大规模扩增培养。但是，PL对诸如牙髓干细胞（dental pulp stem cells，DPSCs）、牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs）及根尖牙乳头干细胞（stem cells from apical papilla，SCAP）等牙源性干细胞的生物学效应尚不明确。本课题在体外分离、培养和鉴定人牙髓干细胞、牙周膜干细胞及根尖牙乳头干细胞的基础上，通过比较体内、外不同培养模式下，PL对这三种牙源性干细胞增殖及分化的影响，以期找到PL应用于牙源性干细胞培养、诱导分化的最佳方式，为研究相关机制及组织工程应用提供实验基础，同时为将来PL在临床治疗方面的应用提供新的思路。结果如下。 1.牙髓干细胞、根尖牙乳头干细胞和牙周膜干细胞的分离、培养和鉴定 使用酶消化法或组织块法分离获得人原代DPSCs、SCAP和PDLSCs，利用有限稀释法克隆化培养以纯化传代细胞；采用免疫细胞染色及流式细胞仪鉴定细胞STRO-1等表型，确定所获细胞的间充质干细胞属性；采用成脂诱导及成骨/成牙本质诱导验证细胞的多向分化能力。 2.血小板裂解液的制备及相关培养体系的建立 使用10人份机采血小板，混合后利用冻融裂解法制得满足实验需要的血小板裂解液PL；将PL制成品以一定的体积浓度比加入普通培养基及矿化诱导培养基配制成条件培养液；将扩增培养所获的牙源性干细胞以平面培养或复合HA-TCP支架培养，营造不同的细胞培养空间环境。 3.血小板裂解液对DPSCs、SCAP和PDLSCs体外增殖、矿化的影响 以体外二维平面培养或复合HA-TCP支架三维培养的DPSCs、SCAP和PDLSCs为靶细胞，研究不同浓度PL对牙源性干细胞增殖及矿化的影响。结果发现：PL对DPSCs的增殖、成骨/成牙本质分化的干预效应与其在培养体系之中的相对浓度、细胞培养的空间模式密切相关；平面及三维培养模式下，5%PL均能够显著促进DPSCs的增殖分化（P＜0.05），同时扫描电镜及组织学观察结果显示，该浓度PL处理组样本在体外三维培养至第14天时，能够形成大量胶原纤维包绕于细胞膜片-支架材料复合体表面；而对于体外三维培养模式下的SCAP和PDLSCs，5%PL同样能够显著促进细胞增殖及矿化基质的形成，并有助于在支架材料上形成完整的细胞膜片样结构，且PDLSCs对于以上效应的应答更为显著，同时SCAP在培养至第7天时，即形成大量胶原纤维包裹于细胞膜片-支架材料复合体表面。 4.血小板裂解液对DPSCs、SCAP和PDLSCs的体内组织再生能力的影响 体内研究结果发现：将经不同浓度PL体外培养14天的DPSCs/HA-TCP支架复合体植入裸鼠背部皮下12周后，发现PL处理组具有更强的体内构建硬组织能力（P＜0.05），而5%PL能够显著提高DPSCs在人离体牙根管腔内再生牙体组织的能力；SCAP及PDLSCs经不同浓度PL培养后，以细胞膜片形式复合HA-TCP支架材料植入裸鼠背部皮下8周后即可分别形成特征性的牙髓牙本质复合体样结构、牙周膜/牙骨质样结构。综上所述，本研究认为一定体积浓度比的PL在DPSCs、SCAP及PDLSCs等牙源性干细胞体内外增殖、定向分化中可能起到促进作用，，在牙组织工程领域具有良好的应用前景。

【关键词】：
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R780.2
【目录】：

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