燃煤型过量氟对仔鼠下切牙牙胚钙调蛋白NCX3和NCKX4表达的影响

发布时间：2017-02-11 14:34

本文关键词：燃煤型过量氟对仔鼠下切牙牙胚钙调蛋白NCX3和NCKX4表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

《遵义医学院》 2016年

燃煤型过量氟对仔鼠下切牙牙胚钙调蛋白NCX3和NCKX4表达的影响

李玲

【摘要】：燃煤型氟中毒是一种典型的地方病,其中贵州省是高发地区。钙稳态的失衡在氟斑牙发病机制中已成为研究热点,但是过量氟对牙齿发育中钙稳态的具体影响研究较少。本团队前期对关于钙离子通道的相关因子:Atp1a1、Atp2b1、Cacna1、NCX1进行了研究,但是与钙稳态相关的两个关键因子NCX3和NCKX4在本课题组前期的研究中未有体现。本实验通过复制燃煤型氟斑牙SD大鼠动物模型,将检测出生第1、3、5、7、9天仔鼠牙胚组织中的钙调蛋白NCX3和NCKX4,进一步探索燃煤型氟斑牙发生与钙稳态的关系。另一实验内容是检测仔鼠血清ALP,是氟中毒骨组织临床诊断的生化指标的一个因子。检测仔鼠第1、2、3周血清ALP表达差异,探索氟中毒对亲代仔鼠ALP活力的影响,进一步探索氟中毒对仔鼠的影响。通过本次实验的研究,为燃煤型氟斑牙的防治提供理论依据。目的:研究燃煤型氟斑牙仔鼠牙胚组织中NCX3和NCKX4,以及血清ALP表达与对照组的差异,初步探讨这些因子与氟斑牙发病机制的关系以及氟中毒对仔鼠的影响。方法:1.建立动物模型:36只3周龄清洁级SD大鼠,随机分为实验组和对照组,每组18只(雌雄比例2:1)。将实验组置于模拟燃煤型氟中毒病区环境的室内,喂养氟含量42.05 mg/kg的饲料。对照组置于普通空气环境的室内并饲以普通饲料。两组均饮用自来水。2.检测内容及方法:每周称量大鼠的体重,对大鼠下切牙唇面正位进行拍照记录,观察大鼠切牙颜色形态的变化。同时收集大鼠的尿液和血液,采用电极法检查血氟和尿氟的变化。动物模型建立成功后,将各组大鼠按雌雄比例2:1合笼交配并产仔。将出生第1、3、5、7、9天仔鼠处死并于体视显微镜下取出牙胚。通过HE染色切片观察成釉细胞的变化。采用免疫组织化学技术检测NCX3和NCKX4在牙胚发育过程中的组织学定位和半定量。采用实时荧光定量PCR技术检测NCX3和NCKX4在牙胚发育不同阶段中m RNA的表达变化。采集第1、2、3周仔鼠血液,检测ALP水平。结果:1.成功建立燃煤型氟斑牙SD大鼠动物模型。在第4周,肉眼可见牙体中部有白色斑点或斑块。在第6周,白色横纹密集,牙面白垩色区域超过75%。在第8周,整个牙面呈现白垩色,釉质无光泽。2.从第1周到第3周,实验组仔鼠血清ALP水平逐渐升高,而对照组ALP水平逐渐减低。实验组血清ALP水平高于同一时期对照组(P0.05)。3.从病理切片观察到,对照组成釉细胞呈栅栏状紧密排列,分泌期呈高柱状,成熟期呈矮柱状。实验组细胞肿胀,排列紊乱,半桥粒连接不紧密,细胞空泡性变。4.免疫组化结果提示,钙调蛋白NCX3、NCKX4在牙胚的成釉细胞呈阳性表达,实验组仔鼠第1、3、5、7、9天钙调蛋白NCX3、NCKX4阳性表达的IOD/AREA值低于对照组(P0.05或P0.01)。5.相对定量Real-Time PCR结果提示,NCX3、NCKX4基因在实验组仔鼠的第1天表达升高(P0.05),第3、5、7、9天表达降低(P0.05或P0.01)。结论:氟斑牙分子机制可能是燃煤型过量氟使牙胚钙调蛋白NCX3、NCKX4表达下调,钙离子的外排减少,从而减少了钙离子转运至矿化前沿,影响了釉质的矿化和形成,导致氟斑牙的产生。

【关键词】：
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R599.1;R781
【目录】：

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