内皮素B受体激动剂对成牙骨质细胞生物学行为的影响

发布时间：2020-11-19 05:58

　　 1、成牙骨质细胞的培养目的:建立成牙骨质细胞系,观察细胞生长,测试细胞体外矿化能力,检测细胞内ETBR的存在。方法:培养小鼠源性成牙骨质细胞系OCCM-30,观察其生长状态,绘制生长曲线,茜素红染色检测其体外矿化能力,免疫荧光染色检测细胞内ETBR的表达及定位。结果:生长曲线结果示细胞生长迅速,茜素红染色结果示OCCM-30体外诱导可生成矿化结节,免疫荧光结果显示成牙骨质细胞膜上存在ETBR。结论:OCCM-30细胞具有体外矿化潜能,细胞内存在ETBR。2、内皮素B受体激动剂对成牙骨质细胞增殖、凋亡和ALP的影响目的:探讨ETBR激动剂对OCCM-30细胞增殖,凋亡和ALP的影响。方法:采用浓度为10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L和10-6mol/L的ETBR激动剂作为实验组,0 mol/L ETBR激动剂为对照组,MTT法检测成牙骨质细胞增殖变化;流式细胞仪检测凋亡的转变;碱性磷酸酶染色法检测成牙骨质细胞活性的转变。结果:MTT和碱性磷酸酶染色显示,ETBR激动剂抑制细胞增殖和细胞活性,并在一定范围内表现出剂量依赖性;流式结果分析显示ETBR激动剂促进细胞早期凋亡,对晚期凋亡无明显影响。结论:ETBR激动剂以浓度依赖方式抑制成牙骨质细胞增殖和ALP表达,并促进细胞早期凋亡。3、内皮素B受体激动剂对成牙骨质细胞分化的影响目的:检测10-9mol/L的ETBR激动剂对OCCM-30细胞体外矿化、分化的影响。方法:茜素红染色检测细胞体外矿化;real-time PCR法检测分化相关基因Runx2、Bsp、Osterix、Ocn和Coll mRNA相对表达情况;Western blot法检测Runx2和Osterix表达情况。结果:茜素红染色示,ETBR激动剂抑制细胞体外矿化;real-time PCR结果示,Runx2、Bsp、Osterix、Ocn和CollmRNA的表达水平均有不同程度的下调;Western blot示Runx2和Osterix表达下调。结论:10-9mol/L的ETBR激动剂可通过下调分化相关基因Runx2、Bsp、Osterix、Ocn、Coll mRNA表达和减少分化相关蛋白Runx2、Osterix的相对表达水平,抑制OCCM-30细胞体外矿化和分化。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R78
【部分图文】：

图２．１成牙骨质细胞形态（ｘｉ〇）??Ｆｉｇ２．１?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｃｅｍｅｎｔｏｂｌａｓｔｓ?（ｘ?１〇）??

?２．３．３免疫荧光染色??如图２．３所示，经免疫荧光染色，成牙骨质细胞内可见内皮素Ｂ??受体的阳性，主要分布在细胞膜和胞浆。??ｍ??图２．３?ＥＴＢＲ免疫荧光染色（ｘｌ〇）??Ｆｉｇ．２．３?Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｆｏｒ?ＥＴＢＲ?（ｘ?１０）??２．３．４成牙骨质细胞的矿化诱导??细胞矿化诱导过程，细胞融合８０％以上，开始复层生长，细胞增??殖速度降低，开始进行分化，诱导７ｄ时，即可在显微镜下观察到矿??化结节，随诱导时间延长，矿化结节数目增加，体积增大，ｌ〇ｄ时矿??化结节明显。图２．４为诱导１２ｄ，对照组镜下可见零星散布的红染小??结节，诱导组镜下可见遍及皿底的红染矿化结节。??？?？?．．?．??

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本文编号：2889796