原花青素四聚体干预变形链球菌血清型c体外粘附途径及机理研究
发布时间：2020-12-03 23:09
长期研究证明龋病是菌斑在牙齿表面聚集而引起的感染性疾病,变形链球菌族（Streptococci mutans,以下简称S.mutans）作为人类、动物龋病的主要致病因子,对牙面有高度的选择性与亲和力,在口腔中主要分布于牙面。长久以来人们一直试图采用药物控制或预防龋病,但采用的抗生素如青霉素、红霉素或氟化物等,均表现出一定的局限性,因此,寻找一种使用安全并且能有效调理口腔菌群平衡的防龋药物成为研究重点,研究人员开始关注天然产物防龋的研究。现代科学研究表明,茶多酚类物质可有效抑制牙菌斑中厌氧菌的生长。原花青素（Procyanidins, PC）是植物中存在的一类天然多酚化合物,其结构与茶多酚相似,它对S.mutans的抑菌作用及对菌株产酸良好的抑制效果为其在临床预防治疗龋齿,及相关功能性食品的开发提供了广阔的发展空间,但是有关原花青素干预龋齿发生的主要作用途径、分子量大小（聚合度）与作用效果的关系以及作用机理等尚不清楚。本文以高粱外种皮中几种原花青素低聚体为研究材料,通过比较原花青素分子量大小（聚合度）与抑制变形链球菌粘附效果的关系,筛选高活性抑制变形链球菌粘附的原花青素活性成分,在此基础...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：94 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1 变形链球菌毒力因子及其诱发龋病的相关研究
2 天然产物防龋的研究进展
3 多酚与蛋白相互作用研究方法的介绍
3.1 紫外-可见吸收光谱法
3.2 荧光光谱法
3.3 红外光谱法
3.4 圆二色谱法
3.5 高效液相色谱法
3.6 核磁共振法
3.7 毛细管电泳法
4 论文研究内容
5 创新点
第二章 高粱外种皮中低聚体原花青素的分离及鉴定
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验原料与试剂
1.1.2 仪器设备
1.2 实验方法
1.2.1 高粱外种皮原花青素（SPC）的提取
1.2.2 SPC粗提物的纯化
1.2.3 SPC的ESI-MS分析
1.2.4 SPC凝胶色谱分离
1.2.5 SPC各级分的HPLC-MS/MS分析
2 结果与分析
2.1 SPC的提取及纯化
2.2 SPC的MS分析
2.3 SPC凝胶色谱分离
2.4 SPC各级分的HPLC-MS/MS分析
2.4.1 SPC-Ⅰ的HPLC-MS/MS分析
2.4.2 SPC-Ⅱ的HPLC-MS/MS分析
2.4.3 SPC-Ⅲ的HPLC-MS/MS分析
3 结论
第三章 抑制 S.mutans Ingbritt（c）体外粘附高活性成分的筛选
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验原料与试剂
1.1.2 仪器设备
1.2 实验方法
1.2.1 TSB培养基的配制
1.2.2 标准菌夜的制备
1.2.3 SPC-Ⅰ、SPC-Ⅱ和SPC-Ⅲ对S. mutans Ingbritt（c）在试管壁上粘附的抑制作用
50的测定"> 1.2.4 SPC-Ⅰ、SPC-Ⅱ和SPC-Ⅲ对S. mutans Ingbritt（c）IC50的测定
1.2.5 荧光检测SPC粗提物、SPC-Ⅰ、SPC-Ⅱ和SPC-Ⅲ对S.mutans Ingbritt（c）在SHA上粘附的影响
1.2.6 统计分析
2 结果与讨论
2.1 SPC-Ⅰ、SPC-Ⅱ和SPC-Ⅲ对S. mutans Ingbritt（c）在试管壁上粘附的抑制效果
50的测定"> 2.2 SPC-Ⅰ、SPC-Ⅱ和SPC-Ⅲ对S.mutans Ingbritt（c）IC50的测定
2.3 活性成分处理S. mutans Ingbritt（c）干预其在SHA上粘附的影响
2.4 活性成分处理获得性膜干预S.mutans Ingbritt（c）在SHA上粘附的影响
3 结论
第四章 S.mutans Ingbritt（c）主要粘结素的制备
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验原料与试剂
1.1.2 主要仪器设备
1.2 实验方法
1.2.1 培养基的配制及标准菌液的制备
1.2.2 透析袋的前处理
1.2.3 S.mutans Ingbritt（c）中GTFs的制备
1.2.4 GTFs蛋白质含量的测定
1.2.5 GTFs酶活的测定
1.2.6 GTFs产多糖能力的测定
1.2.7 SDS-PAGE及MALDI-TOF-MS分析
2 结果与讨论
2.1 绘制蛋白质标准曲线
2.2 绘制多糖标准曲线
2.3 pI纯化GTFs粗提物
2.3.1 pH范围：3.00～8.50
2.3.2 pH范围：2.50～4.00
2.3.3 pH范围：3.00～3.50
2.4 GTFs的凝胶色谱纯化
2.4.1 Initial粗蛋白凝胶分离结果及性质测定
2.4.2 pH=3.10粗蛋白凝胶分离结果及性质测定
2.4.3 pH=3.40粗蛋白凝胶分离结果及性质测定
2.5 SDS-PAGE及MALDI-TOF-MS分析
3 结论
第五章 SPC-Ⅲ与类GTFS活性蛋白相互作用的研究
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验原料与试剂
1.1.2 仪器设备
1.2 实验方法
1.2.1 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白（3.10、3.10-Ⅰ和3.10-Ⅱ）相互作用的紫外吸收光谱研究
1.2.2 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白3.10-Ⅰ作用前后SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS分析
1.2.3 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白3.10-Ⅰ作用前后2-DE和MALDI-TOF-MS分析
1.2.4 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白3.10-Ⅱ作用前后2-DE和MALDI-TOF-MS分析
2 结果与讨论
2.1 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白相互作用的紫外吸收光谱
2.2 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白3.10-Ⅰ作用前后的SDS-PAGE及MALDI-TOF-MS分析
2.3 2-DE和MALDI-TOF-MS分析与SPC-Ⅲ作用前后的类GTFs活性蛋白3.10-Ⅰ
2.4 2-DE和MALDI-TOF-MS分析与SPC-Ⅲ作用前后的类GTFs活性蛋白3.10-Ⅱ
3 结论
第六章 结论与展望
结论
展望
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]响应面法优化高粱外种皮中原花青素的超声波辅助提取工艺[J]. 黄曼,徐丽嫚,陈静,涂世,刘睿. 食品科学. 2012(24)
[2]高粱原花青素的ESI-MS分析及其低聚体的RP-HPLC-MS/MS法分离鉴定[J]. 徐丽嫚,黄曼,涂世,陈静,刘睿. 食品科学. 2011(20)
[3]中草药牙膏对变形链球菌粘附的影响[J]. 黄光伟,覃青云,卢凯玲,周慧. 口腔护理用品工业. 2011(02)
[4]液相色谱-质谱分析葡萄籽提取物中原花青素[J]. 苏叶萍,杜平,金建秀,许巧霞,刘洪海. 医药导报. 2010(11)
[5]锁阳原花青素的HPLC-MS分析[J]. 高乃群,曹玉华,陶冠军. 现代化工. 2010(10)
[6]没食子鞣质和联合氟化钠对不同状态变链菌葡萄糖基转移酶活性的影响[J]. 林静,赵今,朱明,李新尚. 中华老年口腔医学杂志. 2010(05)
[7]光谱法研究绿原酸与人血清白蛋白的相互作用[J]. 毕淑云,闫丽丽,孙艳涛. 化学分析计量. 2010(02)
[8]变形链球菌黏附相关分子及其针对性免疫防龋的研究进展[J]. 张鹰,文玲英,储冰峰. 中华老年口腔医学杂志. 2010(02)
[9]变形链球菌检测技术新进展[J]. 洪潇,胡德渝. 广东牙病防治. 2009(11)
[10]青蛇果原花青素分离和低聚体纯品的制备[J]. 肖俊松,曹雁平,龚玉石,谢笔钧. 食品科学. 2009(17)
博士论文
[1]药物—人血清白蛋白相互作用的毛细管电泳法研究[D]. 何攀.河北大学 2009
[2]c-di-GMP信号通路在变形链球菌致龋过程中作用的初步研究[D]. 闫文娟.第四军医大学 2009
[3]某些中药活性组分与蛋白质相互作用研究[D]. 李金华.兰州大学 2009
[4]多酚类化合物与血清白蛋白相互作用的结构—结合力关系、理论模型和应用研究[D]. 肖建波.中南大学 2009
[5]中药有效成分与人血清白蛋白相互作用研究[D]. 李颖.兰州大学 2007
[6]药物-蛋白结合作用的HPCE和HPLC法研究[D]. 周大炜.沈阳药科大学 2003
硕士论文
[1]拉曼光谱法研究抗炎药、抗生素及其与DNA的相互作用[D]. 康倩倩.西南大学 2012
[2]黄酮类化合物与牛血清白蛋白的相互作用研究[D]. 李强.南昌大学 2011
[3]光谱法和原子力显微镜研究小分子药物与人血清白蛋白相互作用[D]. 李娜娜.汕头大学 2011
[4]高效亲和色谱法对四种中药活性成分与人血清白蛋白相互作用的研究[D]. 于雪.西北大学 2010
[5]五种中药有效成分与三种球蛋白相互作用的研究[D]. 郑茂东.山西医科大学 2010
[6]光谱法研究三种黄酮类药物小分子与牛血清白蛋白的相互作用[D]. 董念.中南大学 2009
[7]苦荞麦壳中原花青素及其预防龋齿和抗氧化作用研究[D]. 李涛.华中农业大学 2009
[8]绿茶中EGCG提取纯化方法及其与牛血清蛋白相互作用的研究[D]. 王进.山东农业大学 2009
[9]亲和色谱法研究五种中药活性成分与固定化人血清白蛋白的相互作用[D]. 刘丽婷.西北大学 2009
[10]不同龋敏感者变异链球菌临床分离株两种生存状态蛋白表达研究[D]. 邱明.福建医科大学 2009
本文编号：2896614
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：94 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1 变形链球菌毒力因子及其诱发龋病的相关研究
2 天然产物防龋的研究进展
3 多酚与蛋白相互作用研究方法的介绍
3.1 紫外-可见吸收光谱法
3.2 荧光光谱法
3.3 红外光谱法
3.4 圆二色谱法
3.5 高效液相色谱法
3.6 核磁共振法
3.7 毛细管电泳法
4 论文研究内容
5 创新点
第二章 高粱外种皮中低聚体原花青素的分离及鉴定
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验原料与试剂
1.1.2 仪器设备
1.2 实验方法
1.2.1 高粱外种皮原花青素（SPC）的提取
1.2.2 SPC粗提物的纯化
1.2.3 SPC的ESI-MS分析
1.2.4 SPC凝胶色谱分离
1.2.5 SPC各级分的HPLC-MS/MS分析
2 结果与分析
2.1 SPC的提取及纯化
2.2 SPC的MS分析
2.3 SPC凝胶色谱分离
2.4 SPC各级分的HPLC-MS/MS分析
2.4.1 SPC-Ⅰ的HPLC-MS/MS分析
2.4.2 SPC-Ⅱ的HPLC-MS/MS分析
2.4.3 SPC-Ⅲ的HPLC-MS/MS分析
3 结论
第三章 抑制 S.mutans Ingbritt（c）体外粘附高活性成分的筛选
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验原料与试剂
1.1.2 仪器设备
1.2 实验方法
1.2.1 TSB培养基的配制
1.2.2 标准菌夜的制备
1.2.3 SPC-Ⅰ、SPC-Ⅱ和SPC-Ⅲ对S. mutans Ingbritt（c）在试管壁上粘附的抑制作用
50的测定"> 1.2.4 SPC-Ⅰ、SPC-Ⅱ和SPC-Ⅲ对S. mutans Ingbritt（c）IC50的测定
1.2.5 荧光检测SPC粗提物、SPC-Ⅰ、SPC-Ⅱ和SPC-Ⅲ对S.mutans Ingbritt（c）在SHA上粘附的影响
1.2.6 统计分析
2 结果与讨论
2.1 SPC-Ⅰ、SPC-Ⅱ和SPC-Ⅲ对S. mutans Ingbritt（c）在试管壁上粘附的抑制效果
50的测定"> 2.2 SPC-Ⅰ、SPC-Ⅱ和SPC-Ⅲ对S.mutans Ingbritt（c）IC50的测定
2.3 活性成分处理S. mutans Ingbritt（c）干预其在SHA上粘附的影响
2.4 活性成分处理获得性膜干预S.mutans Ingbritt（c）在SHA上粘附的影响
3 结论
第四章 S.mutans Ingbritt（c）主要粘结素的制备
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验原料与试剂
1.1.2 主要仪器设备
1.2 实验方法
1.2.1 培养基的配制及标准菌液的制备
1.2.2 透析袋的前处理
1.2.3 S.mutans Ingbritt（c）中GTFs的制备
1.2.4 GTFs蛋白质含量的测定
1.2.5 GTFs酶活的测定
1.2.6 GTFs产多糖能力的测定
1.2.7 SDS-PAGE及MALDI-TOF-MS分析
2 结果与讨论
2.1 绘制蛋白质标准曲线
2.2 绘制多糖标准曲线
2.3 pI纯化GTFs粗提物
2.3.1 pH范围：3.00～8.50
2.3.2 pH范围：2.50～4.00
2.3.3 pH范围：3.00～3.50
2.4 GTFs的凝胶色谱纯化
2.4.1 Initial粗蛋白凝胶分离结果及性质测定
2.4.2 pH=3.10粗蛋白凝胶分离结果及性质测定
2.4.3 pH=3.40粗蛋白凝胶分离结果及性质测定
2.5 SDS-PAGE及MALDI-TOF-MS分析
3 结论
第五章 SPC-Ⅲ与类GTFS活性蛋白相互作用的研究
引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验原料与试剂
1.1.2 仪器设备
1.2 实验方法
1.2.1 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白（3.10、3.10-Ⅰ和3.10-Ⅱ）相互作用的紫外吸收光谱研究
1.2.2 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白3.10-Ⅰ作用前后SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS分析
1.2.3 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白3.10-Ⅰ作用前后2-DE和MALDI-TOF-MS分析
1.2.4 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白3.10-Ⅱ作用前后2-DE和MALDI-TOF-MS分析
2 结果与讨论
2.1 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白相互作用的紫外吸收光谱
2.2 SPC-Ⅲ与类GTFs活性蛋白3.10-Ⅰ作用前后的SDS-PAGE及MALDI-TOF-MS分析
2.3 2-DE和MALDI-TOF-MS分析与SPC-Ⅲ作用前后的类GTFs活性蛋白3.10-Ⅰ
2.4 2-DE和MALDI-TOF-MS分析与SPC-Ⅲ作用前后的类GTFs活性蛋白3.10-Ⅱ
3 结论
第六章 结论与展望
结论
展望
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]响应面法优化高粱外种皮中原花青素的超声波辅助提取工艺[J]. 黄曼,徐丽嫚,陈静,涂世,刘睿. 食品科学. 2012(24)
[2]高粱原花青素的ESI-MS分析及其低聚体的RP-HPLC-MS/MS法分离鉴定[J]. 徐丽嫚,黄曼,涂世,陈静,刘睿. 食品科学. 2011(20)
[3]中草药牙膏对变形链球菌粘附的影响[J]. 黄光伟,覃青云,卢凯玲,周慧. 口腔护理用品工业. 2011(02)
[4]液相色谱-质谱分析葡萄籽提取物中原花青素[J]. 苏叶萍,杜平,金建秀,许巧霞,刘洪海. 医药导报. 2010(11)
[5]锁阳原花青素的HPLC-MS分析[J]. 高乃群,曹玉华,陶冠军. 现代化工. 2010(10)
[6]没食子鞣质和联合氟化钠对不同状态变链菌葡萄糖基转移酶活性的影响[J]. 林静,赵今,朱明,李新尚. 中华老年口腔医学杂志. 2010(05)
[7]光谱法研究绿原酸与人血清白蛋白的相互作用[J]. 毕淑云,闫丽丽,孙艳涛. 化学分析计量. 2010(02)
[8]变形链球菌黏附相关分子及其针对性免疫防龋的研究进展[J]. 张鹰,文玲英,储冰峰. 中华老年口腔医学杂志. 2010(02)
[9]变形链球菌检测技术新进展[J]. 洪潇,胡德渝. 广东牙病防治. 2009(11)
[10]青蛇果原花青素分离和低聚体纯品的制备[J]. 肖俊松,曹雁平,龚玉石,谢笔钧. 食品科学. 2009(17)
博士论文
[1]药物—人血清白蛋白相互作用的毛细管电泳法研究[D]. 何攀.河北大学 2009
[2]c-di-GMP信号通路在变形链球菌致龋过程中作用的初步研究[D]. 闫文娟.第四军医大学 2009
[3]某些中药活性组分与蛋白质相互作用研究[D]. 李金华.兰州大学 2009
[4]多酚类化合物与血清白蛋白相互作用的结构—结合力关系、理论模型和应用研究[D]. 肖建波.中南大学 2009
[5]中药有效成分与人血清白蛋白相互作用研究[D]. 李颖.兰州大学 2007
[6]药物-蛋白结合作用的HPCE和HPLC法研究[D]. 周大炜.沈阳药科大学 2003
硕士论文
[1]拉曼光谱法研究抗炎药、抗生素及其与DNA的相互作用[D]. 康倩倩.西南大学 2012
[2]黄酮类化合物与牛血清白蛋白的相互作用研究[D]. 李强.南昌大学 2011
[3]光谱法和原子力显微镜研究小分子药物与人血清白蛋白相互作用[D]. 李娜娜.汕头大学 2011
[4]高效亲和色谱法对四种中药活性成分与人血清白蛋白相互作用的研究[D]. 于雪.西北大学 2010
[5]五种中药有效成分与三种球蛋白相互作用的研究[D]. 郑茂东.山西医科大学 2010
[6]光谱法研究三种黄酮类药物小分子与牛血清白蛋白的相互作用[D]. 董念.中南大学 2009
[7]苦荞麦壳中原花青素及其预防龋齿和抗氧化作用研究[D]. 李涛.华中农业大学 2009
[8]绿茶中EGCG提取纯化方法及其与牛血清蛋白相互作用的研究[D]. 王进.山东农业大学 2009
[9]亲和色谱法研究五种中药活性成分与固定化人血清白蛋白的相互作用[D]. 刘丽婷.西北大学 2009
[10]不同龋敏感者变异链球菌临床分离株两种生存状态蛋白表达研究[D]. 邱明.福建医科大学 2009
本文编号：2896614
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