高表达的长链非编码RNA CASC9通过激活AKT/mTOR信号通路抑制细胞自噬及自噬介导的凋亡从而促进口腔鳞癌发展

发布时间：2020-12-04 03:22

　　背景:近年研究显示lncRNA CASC9在多种肿瘤中表达升高,发挥重要的促癌作用。然而,CASC9在口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）中的表达及其生物学功能尚不清楚。目的:研究CASC9在OSCC中的表达和临床意义,并在体内外验证CASC9的生物学功能。方法:用RT-qPCR检测35例配对口腔鳞癌和癌旁组织中CASC9的表达水平。用RT-qPCR检测OSCC细胞系和正常口腔黏膜细胞系中CASC9的表达水平。用原位杂交检测具有完整临床资料和随访资料的84例口腔鳞癌患者标本中CASC9的表达水平,分析CASC9的表达水平与口腔鳞癌临床病理参数的相关性及对OSCC病人生存的影响。免疫组化检测84例口腔鳞癌患者标本中p-AKT与LC3B的蛋白表达水平,并分别统计p-AKT与LC3B蛋白表达水平与CASC9表达的相关性。用siRNA沉默CASC9在OSCC细胞中表达后,分别用MTT实验检测细胞活性、流式细胞术和Tunel实验检测细胞凋亡、电镜下观察自噬,western blotting检测AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、LC3B、P62、... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

沉默CASC9后抑制SCC15和CAL27细胞的增殖,促进凋亡

44图 3 沉默 CASC9 后促进 SCC15 和 CAL27 细胞自噬。Fig. 3 CASC9 knockdown promotes autophagy in SCC15 and CAL27 cells.a.TEM 实验发现沉默 CASC9 后 SCC15,CAL27 细胞系中的自噬小体密度增加（低倍 scalebars = 2μm；高倍 scale bars = 1μm）。b.免疫荧光实验检测发现沉默 CASC9 的 SCC15 和 CAL27细胞中 LC3B 荧光强度增强，而 P62 荧光强度减弱。c-d.在 SCC15 和 CAL27 细胞系中敲减CASC9 的表达水平后，western blotting 检测到 LC3B Ⅱ/LC3B Ⅰ相对表达水平升高，但 P62蛋白表达水平降低 LC3B mRNA 相对表达升高,P62 mRNA 表达降低。所有数据均代表三个独立实验。数据以 mean ± SD 展示(n≥3)。*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；****，P<0.0000。

图 4 沉默 CASC9 后 AKT/mTOR 信号通路活性降低。Fig. 4 Silencing CASC9 inhibits the activation of the AKT/mTOR signaling pathway.Western Blotting 检测到沉默 CASC9 的 SCC15 和 CAL27 细胞系中 p-AKT 和 p-mTOR 的表达水平较 si-NC 组均显著降低；而总 AKT 和总 mTOR 蛋白表达水平无显著变化。所有数据均代表三个独立实验。数据以 mean ± SD 展示(n≥3)。*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；****，P<0.0000。


本文编号：2896939