大鼠牙髓干细胞培养鉴定及生物学特性研究
发布时间：2020-12-06 09:05
干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，它包括胚胎干细胞和成体干细胞。目前已经成功分离培养包括来自骨髓、肌肉、神经、上皮等组织的成体干细胞。牙髓干细胞是位于牙髓组织的一种成体干细胞。2000年，Gronthos等首先成功地分离培养出人牙髓干细胞，为干细胞的研究开辟了一个新的领域。牙髓干细胞具有同其他成体干细胞相似的生物学特性，具有较强的克隆形成能力，可以分化为牙髓组织中的终末功能细胞并具有一定的横向分化能力。目前国内外只有人牙髓干细胞培养成功的报道，鼠牙髓干细胞的相关研究国内外还未见报道，而鼠是实验研究最常用的模型，它具有取材容易、与人同源性较高等优点，因此本研究以大鼠为实验对象，采用细胞克隆分离培养方式进行大鼠牙髓干细胞的培养，同时对大鼠牙髓干细胞进行了一系列生物学特性研究，为牙髓干细胞的研究增加了新的内容，为牙齿再生的研究奠定基础。 第一部分：大鼠牙髓干细胞的分离培养及鉴定 本部分实验采用细胞克隆分离培养的方式，对大鼠牙髓细胞进行克隆筛选，将获得的单细胞克隆来源的细胞进行体外诱导分化及体内接种实验，结果共获得4株单细胞克隆来源细胞株(282、6A11、8A1、8A7)...
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
矿化液诱导组RT.PCR产物凝胶电泳图
7Y染色体Sry基因检测鉴定来源:移植物基因组DNA经PcR扩增后，出现272饰大小扩增产物条带，与预期设计吻合，内参照压actin出现618bp亮条带(图1.3.9)。日一actins叮marker图1.3.9大鼠sry基因RT一PCR检测3讨论本研究采用细胞裸鼠体内种植和体外细胞诱导的鉴定方法，复苏后的细胞在经过矿化液诱导后，部分细胞可出现细长的单个胞浆突起，与成牙本质细胞胞浆突起相似。成牙本质细胞是形成牙本质的前体细胞，目前对成牙本质细胞的研究较多I‘7，’8}，学者们主要利用牙乳头细胞的体外诱导培养来获得成牙本质细胞，然而用于诱导的多为TGF-p、QFGF、IGF一1等价格昂贵的细胞因子I’9一“’1，本研究采用矿化诱导培养液对牙髓干细胞进行诱导培养，同样获得成牙本质细胞样细胞。牙本质涎磷蛋白(dentinsial。Ph。Sphopr。tein
大小的扩增产物条带，与设计PPARg片段大小吻合，脂肪组织对照结果出现同样大小条带，内参照GA卫DH(299如)条带清晰，未诱导组细胞无扩增产物(图3.2.2)。6人pOH胭脚组叭祝钾质m目生份行导盯图3.2.2大鼠牙位千细胞脂肪系诱导PCR电泳结果2.2神经细胞系诱导结果:经诱导后大鼠牙翻千细胞RT.PCR产物凝胶电泳，未见预期扩增产物条带，对照组出现403饰大小条带，与设计p一肌球蛋白重链基因片段大小吻合，内参照GA卫DH(299饰)条带清晰，未诱导组细胞同样无扩增产物条带(图3.2.3)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]多孔磷酸三钙的细胞毒性研究[J]. 黄哲玮,卢建熙. 口腔材料器械杂志. 2003(02)
[2]5-氮胞苷对培养大鼠骨髓基质细胞β肌球蛋白重链表达的影响 骨髓干细胞移植与心肌修复的相关效应[J]. 卢新政,黄峻,马根山,侯麦花. 中国临床康复. 2003(09)
[3]以β-磷酸三钙多孔陶瓷为载体建造组织工程化人工软骨[J]. 王常勇,薄斌,赵强,郭希民,段翠密,王永红,范明,卢建熙. 中华整形外科杂志. 2002(01)
[4]成年大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞[J]. 肖庆忠,温冠媚,李浩威,李红乐,李树浓. 中风与神经疾病杂志. 2001(06)
[5]干细胞的研究进展及临床应用前景[J]. 李凌松,朱建健,杜仪琴,汤健,李凌衡. 生理科学进展. 2001(02)
[6]胚胎干细胞的生物学特性及体外诱导分化[J]. 潘兴华,郭坤元,陈系古,陈永乐,陆家海. 生命科学研究. 2000(S1)
[7]人的类胚胎干细胞的分离和培养[J]. 徐令,黄绍良,李树浓,周灿权,乔春平,张敏芳. 中山医科大学学报. 1998(01)
[8]体外培养的人牙龈牙周膜牙髓纤维细胞生长及形态特点[J]. 吴军正,司徒镇强,陈建元,王为,刘斌. 实用口腔医学杂志. 1993(04)
[9]骨形成蛋白影响人牙髓纤维样细胞生物学特性的体外观察[J]. 高玉好,杨连甲. 实用口腔医学杂志. 1993(04)
本文编号：2901117
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
矿化液诱导组RT.PCR产物凝胶电泳图
7Y染色体Sry基因检测鉴定来源:移植物基因组DNA经PcR扩增后，出现272饰大小扩增产物条带，与预期设计吻合，内参照压actin出现618bp亮条带(图1.3.9)。日一actins叮marker图1.3.9大鼠sry基因RT一PCR检测3讨论本研究采用细胞裸鼠体内种植和体外细胞诱导的鉴定方法，复苏后的细胞在经过矿化液诱导后，部分细胞可出现细长的单个胞浆突起，与成牙本质细胞胞浆突起相似。成牙本质细胞是形成牙本质的前体细胞，目前对成牙本质细胞的研究较多I‘7，’8}，学者们主要利用牙乳头细胞的体外诱导培养来获得成牙本质细胞，然而用于诱导的多为TGF-p、QFGF、IGF一1等价格昂贵的细胞因子I’9一“’1，本研究采用矿化诱导培养液对牙髓干细胞进行诱导培养，同样获得成牙本质细胞样细胞。牙本质涎磷蛋白(dentinsial。Ph。Sphopr。tein
大小的扩增产物条带，与设计PPARg片段大小吻合，脂肪组织对照结果出现同样大小条带，内参照GA卫DH(299如)条带清晰，未诱导组细胞无扩增产物(图3.2.2)。6人pOH胭脚组叭祝钾质m目生份行导盯图3.2.2大鼠牙位千细胞脂肪系诱导PCR电泳结果2.2神经细胞系诱导结果:经诱导后大鼠牙翻千细胞RT.PCR产物凝胶电泳，未见预期扩增产物条带，对照组出现403饰大小条带，与设计p一肌球蛋白重链基因片段大小吻合，内参照GA卫DH(299饰)条带清晰，未诱导组细胞同样无扩增产物条带(图3.2.3)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]多孔磷酸三钙的细胞毒性研究[J]. 黄哲玮,卢建熙. 口腔材料器械杂志. 2003(02)
[2]5-氮胞苷对培养大鼠骨髓基质细胞β肌球蛋白重链表达的影响 骨髓干细胞移植与心肌修复的相关效应[J]. 卢新政,黄峻,马根山,侯麦花. 中国临床康复. 2003(09)
[3]以β-磷酸三钙多孔陶瓷为载体建造组织工程化人工软骨[J]. 王常勇,薄斌,赵强,郭希民,段翠密,王永红,范明,卢建熙. 中华整形外科杂志. 2002(01)
[4]成年大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞[J]. 肖庆忠,温冠媚,李浩威,李红乐,李树浓. 中风与神经疾病杂志. 2001(06)
[5]干细胞的研究进展及临床应用前景[J]. 李凌松,朱建健,杜仪琴,汤健,李凌衡. 生理科学进展. 2001(02)
[6]胚胎干细胞的生物学特性及体外诱导分化[J]. 潘兴华,郭坤元,陈系古,陈永乐,陆家海. 生命科学研究. 2000(S1)
[7]人的类胚胎干细胞的分离和培养[J]. 徐令,黄绍良,李树浓,周灿权,乔春平,张敏芳. 中山医科大学学报. 1998(01)
[8]体外培养的人牙龈牙周膜牙髓纤维细胞生长及形态特点[J]. 吴军正,司徒镇强,陈建元,王为,刘斌. 实用口腔医学杂志. 1993(04)
[9]骨形成蛋白影响人牙髓纤维样细胞生物学特性的体外观察[J]. 高玉好,杨连甲. 实用口腔医学杂志. 1993(04)
本文编号：2901117
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/kouq/2901117.html
