体外研究DKK1在牙囊细胞的表达及在成骨分化的作用机制

发布时间：2020-12-10 22:58

　　目的:观察Wnt/β-catenin通路的抑制因子DKK1（Dickkopf-1）在牙囊细胞中的表达,探究在牙囊细胞成骨分化诱导和成熟成骨细胞的形成中DKK1的特异性表达机制,探讨其与牙齿萌出和颌骨生长发育的相关性。方法:采用酶消化法分离培养牙囊细胞并纯化细胞。将纯化牙囊细胞分为两组,对照组:普通α-MEM培养基培养,实验组:α-MEM+成骨诱导液培养。分别培养5d后,ALP染色鉴定成骨细胞的骨形成情况,采用免疫细胞化学法分组观察DKK1的表达分布;分别培养10d、20d后采用Western Blot分组检测DKK1、β-catenin、Runx2的蛋白表达水平。结果:镜下显示实验组细胞ALP染色呈阳性,免疫组织化学显示DKK1在实验组表达较对照组减弱;Western Blot检测结果示实验组Wnt通路的关键因子DKK1条带蛋白表达下调,β-catenin蛋白及成骨相关蛋白Runx2的表达上调,培养时间越长实验组与对照组区别随之变化明显。结论:Wnt通路抑制剂DKK1在牙囊细胞中有表达且受成骨分化影响,体现Wnt/β-catenin通路中DKK1的抑制作用,研究结果将为牙齿萌出和颌骨生... 

【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

纯化牙囊细胞形态为梭形或三角形×50

图 2 碱性磷酸酶染色Fig.2Alkaline phosphatase staining 免疫细胞化学法观察 DKK1 表达成骨诱导组干预 5d 后，根据有无表达和染色深浅程度判定 DKK1 在牙囊细胞表达，分为阴性、弱阳性、阳性，阴性表达为无特殊颜色染色，弱阳性表现为浅

分为阴性、弱阳性、阳性，阴性表达为无特殊颜色染色，弱阳性表现为浅色或浅棕色，阳性染色表现为深黄或棕褐色为。观察对照组 DKK1 在牙囊细胞中表达呈棕褐色(图 3a)，实验组的表达呈浅棕色(图 3b),阴性空白组未见黄色或棕褐特殊染色颗粒(图 3c)。成骨干预后 DKK1 在牙囊细胞中表达随时间增加而减少，明骨抑制因子 DKK1 与成骨细胞呈负相关。

【参考文献】：
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本文编号：2909427