体外研究DKK1在牙囊细胞的表达及在成骨分化的作用机制
发布时间:2020-12-10 22:58
目的:观察Wnt/β-catenin通路的抑制因子DKK1(Dickkopf-1)在牙囊细胞中的表达,探究在牙囊细胞成骨分化诱导和成熟成骨细胞的形成中DKK1的特异性表达机制,探讨其与牙齿萌出和颌骨生长发育的相关性。方法:采用酶消化法分离培养牙囊细胞并纯化细胞。将纯化牙囊细胞分为两组,对照组:普通α-MEM培养基培养,实验组:α-MEM+成骨诱导液培养。分别培养5d后,ALP染色鉴定成骨细胞的骨形成情况,采用免疫细胞化学法分组观察DKK1的表达分布;分别培养10d、20d后采用Western Blot分组检测DKK1、β-catenin、Runx2的蛋白表达水平。结果:镜下显示实验组细胞ALP染色呈阳性,免疫组织化学显示DKK1在实验组表达较对照组减弱;Western Blot检测结果示实验组Wnt通路的关键因子DKK1条带蛋白表达下调,β-catenin蛋白及成骨相关蛋白Runx2的表达上调,培养时间越长实验组与对照组区别随之变化明显。结论:Wnt通路抑制剂DKK1在牙囊细胞中有表达且受成骨分化影响,体现Wnt/β-catenin通路中DKK1的抑制作用,研究结果将为牙齿萌出和颌骨生...
【文章来源】:新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】:44 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
纯化牙囊细胞形态为梭形或三角形×50
图 2 碱性磷酸酶染色Fig.2Alkaline phosphatase staining 免疫细胞化学法观察 DKK1 表达成骨诱导组干预 5d 后,根据有无表达和染色深浅程度判定 DKK1 在牙囊细胞表达,分为阴性、弱阳性、阳性,阴性表达为无特殊颜色染色,弱阳性表现为浅
分为阴性、弱阳性、阳性,阴性表达为无特殊颜色染色,弱阳性表现为浅色或浅棕色,阳性染色表现为深黄或棕褐色为。观察对照组 DKK1 在牙囊细胞中表达呈棕褐色(图 3a),实验组的表达呈浅棕色(图 3b),阴性空白组未见黄色或棕褐特殊染色颗粒(图 3c)。成骨干预后 DKK1 在牙囊细胞中表达随时间增加而减少,明骨抑制因子 DKK1 与成骨细胞呈负相关。
【参考文献】:
期刊论文
[1]多发性骨髓瘤患者骨髓上清液和血清DKK1表达水平及其临床意义[J]. 陈双,张正昊,张敏,郝建萍. 中华全科医学. 2017(09)
[2]2581名儿童乳牙萌出情况的横断面研究[J]. 李瑞香,胡燕. 中华儿科杂志. 2017 (01)
[3]牙囊干细胞诱导成骨的体外研究[J]. 汪晨,徐燕,杨洋,孟明理,王敬,周永敏,王晓静. 口腔医学研究. 2016(08)
[4]无翅型MMTV整合位点家族成员5A/受体酪氨酸激酶样孤儿受体2在大鼠牙囊细胞中的表达及其意义[J]. 王丽萍,李伯琦,王琪,铁晓敏,刘奕杉. 华西口腔医学杂志. 2016(04)
[5]miR-92b-3p促进人脐带间充质干细胞的成骨分化[J]. 张燕,严冰浩,徐辰,顾道兰,王越,刘厚奇. 基础医学与临床. 2016(05)
[6]MicroRNA在难治性癫痫诊断中的研究进展[J]. 王小峰,尹剑. 中华神经外科杂志. 2016 (03)
[7]经典Wnt信号通路在牙周膜细胞成骨分化过程中的调控[J]. 廖海清,曹正国. 口腔医学研究. 2016(03)
[8]双向差速法纯化大鼠牙囊细胞[J]. 王丽萍,李伯琦,铁晓敏,王琪,刘奕杉. 口腔疾病防治. 2016(03)
[9]经典Wnt信号通路对骨代谢的调节作用[J]. 徐伟丽,牛玲玲,王文侠,崔鹏举. 中国骨质疏松杂志. 2016(03)
[10]DKK1-siRNA真核表达载体的构建及其对骨质疏松大鼠治疗作用的研究[J]. 刘媛,剧锦哲,张伟,庞春艳,武剑,吕凤凤,王永福. 中国骨质疏松杂志. 2015(02)
本文编号:2909427
【文章来源】:新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】:44 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
纯化牙囊细胞形态为梭形或三角形×50
图 2 碱性磷酸酶染色Fig.2Alkaline phosphatase staining 免疫细胞化学法观察 DKK1 表达成骨诱导组干预 5d 后,根据有无表达和染色深浅程度判定 DKK1 在牙囊细胞表达,分为阴性、弱阳性、阳性,阴性表达为无特殊颜色染色,弱阳性表现为浅
分为阴性、弱阳性、阳性,阴性表达为无特殊颜色染色,弱阳性表现为浅色或浅棕色,阳性染色表现为深黄或棕褐色为。观察对照组 DKK1 在牙囊细胞中表达呈棕褐色(图 3a),实验组的表达呈浅棕色(图 3b),阴性空白组未见黄色或棕褐特殊染色颗粒(图 3c)。成骨干预后 DKK1 在牙囊细胞中表达随时间增加而减少,明骨抑制因子 DKK1 与成骨细胞呈负相关。
【参考文献】:
期刊论文
[1]多发性骨髓瘤患者骨髓上清液和血清DKK1表达水平及其临床意义[J]. 陈双,张正昊,张敏,郝建萍. 中华全科医学. 2017(09)
[2]2581名儿童乳牙萌出情况的横断面研究[J]. 李瑞香,胡燕. 中华儿科杂志. 2017 (01)
[3]牙囊干细胞诱导成骨的体外研究[J]. 汪晨,徐燕,杨洋,孟明理,王敬,周永敏,王晓静. 口腔医学研究. 2016(08)
[4]无翅型MMTV整合位点家族成员5A/受体酪氨酸激酶样孤儿受体2在大鼠牙囊细胞中的表达及其意义[J]. 王丽萍,李伯琦,王琪,铁晓敏,刘奕杉. 华西口腔医学杂志. 2016(04)
[5]miR-92b-3p促进人脐带间充质干细胞的成骨分化[J]. 张燕,严冰浩,徐辰,顾道兰,王越,刘厚奇. 基础医学与临床. 2016(05)
[6]MicroRNA在难治性癫痫诊断中的研究进展[J]. 王小峰,尹剑. 中华神经外科杂志. 2016 (03)
[7]经典Wnt信号通路在牙周膜细胞成骨分化过程中的调控[J]. 廖海清,曹正国. 口腔医学研究. 2016(03)
[8]双向差速法纯化大鼠牙囊细胞[J]. 王丽萍,李伯琦,铁晓敏,王琪,刘奕杉. 口腔疾病防治. 2016(03)
[9]经典Wnt信号通路对骨代谢的调节作用[J]. 徐伟丽,牛玲玲,王文侠,崔鹏举. 中国骨质疏松杂志. 2016(03)
[10]DKK1-siRNA真核表达载体的构建及其对骨质疏松大鼠治疗作用的研究[J]. 刘媛,剧锦哲,张伟,庞春艳,武剑,吕凤凤,王永福. 中国骨质疏松杂志. 2015(02)
本文编号:2909427
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