牙龈卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞—破骨细胞间EphB4-ephrinB2双向传导信号的影响
发布时间：2020-12-21 10:12
骨的吸收与重建是一个重要且复杂的生命过程，而在其过程中常伴有多种偶联及信号传导机制。目前越来越多的学者立足于EphB4-ephrinB2介导的双向信号传导在骨稳态中的作用。而牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）作为牙周病致病菌的主要毒力因子，在导致牙槽骨局部骨稳态的失衡而致其骨吸收方面起非常重要的作用。但目前有关Pg-LPS对EphB4-ephrinB2受体配体家族作用的研究较少。为探讨牙槽骨吸收的关键因子脂多糖对成骨细胞-破骨细胞间的EphB4-ephrinB2双向信号传导通路作用，本实验拟在体外建立小鼠颌骨成骨细胞-破骨细胞共育体系，采用RT-PCR、Western blot、免疫荧光等方法，观察脂多糖介导下破骨细胞和成骨细胞间EphB4-ephrinB2信号分子在基因水平和蛋白水平表达的特点，阐明EphB4-ephrinB2双向信号通路调控下引起牙槽骨局部骨稳态失衡的分子机制，将为牙周病防治提供新思路。主要得出以下结论：1.经破骨细胞细胞液诱导4-5天后RAW264.7单核/巨噬细胞细胞系表达ephrinB2配体蛋白；2.75ng/ml LPS对成骨细胞-破骨细胞间的EphB4-...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
目录
英文缩写词表
第一章 绪论
1.1 Eph-ephrin 受体配体家族及其所介导的双向信号传导通路
1.1.1 Eph-ephrin 受体配体家族
1.1.2 Eph-ephrin 信号传导模式
1.2 Eph-ephrin 受体配体家族在骨稳态中的作用
1.2.1 骨稳态
1.2.2 Eph-ephrin 受体配体家族在骨稳态中的作用
1.3 牙龈卟啉单胞菌脂多糖
1.4 牙龈卟啉单胞菌脂多糖与骨代谢
1.5 立题意义
1.6 综述
第二章 小鼠下颌骨成骨细胞的提取及鉴定
2.1 实验材料与方法
2.1.1 主要设备及试剂
2.1.2 实验方法及操作步骤
2.2 实验结果
2.2.1 原代新生小鼠下颌骨成骨细胞的形态
2.2.2 成骨细胞的鉴定
2.2.3 不同浓度 LPS 对小鼠颌骨成骨细胞增殖的影响
第三章 破骨细胞的获得与鉴定及小鼠成骨细胞-破骨细胞共育体的建立
3.1 实验材料
3.1.1 主要仪器及试剂
3.1.2 实验方法及操作步骤
3.2 实验结果
3.2.1 倒置显微镜下观察
3.2.2 破骨细胞 TRAP 染色结果
第四章 在基因水平检测 LPS 对小鼠成骨细胞-破骨细胞间EphB4-ephrinB2 双向传导信号的影响
4.1 实验材料及方法
4.1.1 实验材料及设备
4.1.2 实验方法
4.2 实验结果
4.2.1 RT-PCR 实验结果结果
4.2.2 Realtime-PCR 实验结果
第五章 在蛋白水平检测 LPS 对小鼠成骨细胞-破骨细胞间EphB4-ephrinB2 双向传导信号的影响
5.1 Western Blot
5.1.1 实验仪器及试剂
5.1.2 实验方法及操作步骤
5.2 免疫荧光单染
5.2.1 主要实验仪器及试剂
5.2.2 实验方法
5.3 免疫荧光双染
5.3.1 主要实验仪器及试剂
5.3.2 实验方法
5.4 实验结果
5.4.1 Western Blotting 检测未经诱导的 RAW264.7 细胞与诱导后的 RAW264.7 细胞 ephrinB2 蛋白的表达
5.4.2 免疫荧光检测未经诱导的 RAW264.7 细胞与诱导后的RAW264.7 细胞 ephrinB2 蛋白的表达
5.4.3 Western Blotting 检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体 EphB4 表达的影响
5.4.4 免疫荧光检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体EphB4 表达的影响
5.4.5 Western Blotting 检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体 ephrinB2 表达的影响
5.4.6 免疫荧光检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体ephrinB2 表达的影响
5.5 小结
第六章 讨论
6.1 实验方法
6.1.1 新生小鼠下颌骨成骨细胞的提取
6.1.2 破骨细胞的诱导
6.2 LPS 对成骨细胞-破骨细胞间 EphB4 受体的促进作用
6.3 LPS 对成骨细胞-破骨细胞间 ephrinB2 受体的作用
第七章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]破骨细胞前体细胞的研究进展[J]. 赵熠,蔡育,王贻宁. 国际口腔医学杂志. 2011(06)
[2]Ephrin-A3在脂多糖处理后星形胶质细胞增殖中的表达[J]. 王继先,张博爱,刘宇,何昕,李林,张勤. 中国病理生理杂志. 2011(09)
[3]机械扩张力作用下小鼠腭中缝EphB4和ephrinB2表达的研究[J]. 董文玉,王林,张卫兵,杨宝宽. 口腔医学. 2011(06)
[4]大鼠胎鼠成骨细胞原代培养方法研究[J]. 袁月,哈斯达莱,祝海霆,吴琳,钟鸣. 中国实用口腔科杂志. 2010(10)
[5]LPS诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖并增加NF-κB p65蛋白的表达[J]. 王乐禹,蒋萱,余磊,胡哓芳,汪海仪,欧阳钧,邱小忠. 中国病理生理杂志. 2010(06)
[6]贴壁组织块反复消化法培养新生大鼠下颌骨成骨细胞及鉴定[J]. 鄂玲玲,刘洪臣,王东胜. 华西口腔医学杂志. 2009(02)
[7]脂多糖对星形胶质细胞的生长具有双重性[J]. 李学忠,周媛,刘春风,白龙梅. 细胞与分子免疫学杂志. 2007(10)
[8]用酶消化-连续组织块法培养SD大鼠成骨细胞的研究[J]. 刘江涛,王永清,张卫国,葛保健,叶锋,梁新军,夏仁云. 中国中医骨伤科杂志. 2006(06)
[9]乳鼠成骨细胞的原代培养与鉴定[J]. 钟近洁,张东辉,许永华,刘开泰,李建瑛,塔拉甫·托坎,李扬,高鑫,莫良. 新疆医科大学学报. 2006(08)
[10]鼠胚成骨细胞的原代培养与鉴定[J]. 傅德皓,杨述华,马德彰,李鲲,郜勇. 创伤外科杂志. 2006(02)
本文编号：2929655
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：博士
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第一章 绪论
1.1 Eph-ephrin 受体配体家族及其所介导的双向信号传导通路
1.1.1 Eph-ephrin 受体配体家族
1.1.2 Eph-ephrin 信号传导模式
1.2 Eph-ephrin 受体配体家族在骨稳态中的作用
1.2.1 骨稳态
1.2.2 Eph-ephrin 受体配体家族在骨稳态中的作用
1.3 牙龈卟啉单胞菌脂多糖
1.4 牙龈卟啉单胞菌脂多糖与骨代谢
1.5 立题意义
1.6 综述
第二章 小鼠下颌骨成骨细胞的提取及鉴定
2.1 实验材料与方法
2.1.1 主要设备及试剂
2.1.2 实验方法及操作步骤
2.2 实验结果
2.2.1 原代新生小鼠下颌骨成骨细胞的形态
2.2.2 成骨细胞的鉴定
2.2.3 不同浓度 LPS 对小鼠颌骨成骨细胞增殖的影响
第三章 破骨细胞的获得与鉴定及小鼠成骨细胞-破骨细胞共育体的建立
3.1 实验材料
3.1.1 主要仪器及试剂
3.1.2 实验方法及操作步骤
3.2 实验结果
3.2.1 倒置显微镜下观察
3.2.2 破骨细胞 TRAP 染色结果
第四章 在基因水平检测 LPS 对小鼠成骨细胞-破骨细胞间EphB4-ephrinB2 双向传导信号的影响
4.1 实验材料及方法
4.1.1 实验材料及设备
4.1.2 实验方法
4.2 实验结果
4.2.1 RT-PCR 实验结果结果
4.2.2 Realtime-PCR 实验结果
第五章 在蛋白水平检测 LPS 对小鼠成骨细胞-破骨细胞间EphB4-ephrinB2 双向传导信号的影响
5.1 Western Blot
5.1.1 实验仪器及试剂
5.1.2 实验方法及操作步骤
5.2 免疫荧光单染
5.2.1 主要实验仪器及试剂
5.2.2 实验方法
5.3 免疫荧光双染
5.3.1 主要实验仪器及试剂
5.3.2 实验方法
5.4 实验结果
5.4.1 Western Blotting 检测未经诱导的 RAW264.7 细胞与诱导后的 RAW264.7 细胞 ephrinB2 蛋白的表达
5.4.2 免疫荧光检测未经诱导的 RAW264.7 细胞与诱导后的RAW264.7 细胞 ephrinB2 蛋白的表达
5.4.3 Western Blotting 检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体 EphB4 表达的影响
5.4.4 免疫荧光检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体EphB4 表达的影响
5.4.5 Western Blotting 检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体 ephrinB2 表达的影响
5.4.6 免疫荧光检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体ephrinB2 表达的影响
5.5 小结
第六章 讨论
6.1 实验方法
6.1.1 新生小鼠下颌骨成骨细胞的提取
6.1.2 破骨细胞的诱导
6.2 LPS 对成骨细胞-破骨细胞间 EphB4 受体的促进作用
6.3 LPS 对成骨细胞-破骨细胞间 ephrinB2 受体的作用
第七章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]破骨细胞前体细胞的研究进展[J]. 赵熠,蔡育,王贻宁. 国际口腔医学杂志. 2011(06)
[2]Ephrin-A3在脂多糖处理后星形胶质细胞增殖中的表达[J]. 王继先,张博爱,刘宇,何昕,李林,张勤. 中国病理生理杂志. 2011(09)
[3]机械扩张力作用下小鼠腭中缝EphB4和ephrinB2表达的研究[J]. 董文玉,王林,张卫兵,杨宝宽. 口腔医学. 2011(06)
[4]大鼠胎鼠成骨细胞原代培养方法研究[J]. 袁月,哈斯达莱,祝海霆,吴琳,钟鸣. 中国实用口腔科杂志. 2010(10)
[5]LPS诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖并增加NF-κB p65蛋白的表达[J]. 王乐禹,蒋萱,余磊,胡哓芳,汪海仪,欧阳钧,邱小忠. 中国病理生理杂志. 2010(06)
[6]贴壁组织块反复消化法培养新生大鼠下颌骨成骨细胞及鉴定[J]. 鄂玲玲,刘洪臣,王东胜. 华西口腔医学杂志. 2009(02)
[7]脂多糖对星形胶质细胞的生长具有双重性[J]. 李学忠,周媛,刘春风,白龙梅. 细胞与分子免疫学杂志. 2007(10)
[8]用酶消化-连续组织块法培养SD大鼠成骨细胞的研究[J]. 刘江涛,王永清,张卫国,葛保健,叶锋,梁新军,夏仁云. 中国中医骨伤科杂志. 2006(06)
[9]乳鼠成骨细胞的原代培养与鉴定[J]. 钟近洁,张东辉,许永华,刘开泰,李建瑛,塔拉甫·托坎,李扬,高鑫,莫良. 新疆医科大学学报. 2006(08)
[10]鼠胚成骨细胞的原代培养与鉴定[J]. 傅德皓,杨述华,马德彰,李鲲,郜勇. 创伤外科杂志. 2006(02)
本文编号：2929655
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