髁突软骨中GLI2对下颌功能前伸力的应答

发布时间：2017-04-08 23:02

  本文关键词：髁突软骨中GLI2对下颌功能前伸力的应答，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:髁突软骨具有终生改建的能力,除受到机体自身遗传、体液、神经等因素控制之外,其局部所受的各种应力刺激对髁突改建起重要作用。髁突软骨细胞能够感受各种应力刺激,并将其转化为化学,生物信号,继而产生细胞增殖、分化和程序性细胞死亡等一系列的反应。临床上应用功能矫治器通过改变髁突周围生物力学环境达到刺激髁突生长改建的目的。然而在机械应力作用后,髁突软骨细胞如何应答机械应力刺激,并将刺激信号转导进入细胞内,进而调节髁突骨改建的细胞机制尚未得到清楚的认识。锌指蛋白2(Gli2)作为转录因子参与调节胚胎发育和器官形成。胚胎发育完成后,生理状态下,细胞分泌Gli2于细胞质并迅速水解。细胞增殖分化过程中,细胞质中的Gli2转向细胞核激活其目的基因,调节细胞增殖分化。近年来有研究发现转录因子Gli2与应力刺激后细胞信号转导和调控过程有关,并且Gli2与髁突软骨细胞增殖,分化以及骨形成存在密切联系。PCNA是细胞周期特定时相内表达的细胞核酸性蛋白,能有效反映细胞增殖功能,也是公认的细胞增殖活动的标志之一,本文中其作为转录因子Gli2促进细胞增殖功能参照物而入选本研究。本实验采用组织学染色,免疫组织化学染色的方法观察和检测大鼠下颌功能前伸后组织形态学变化,髁突软骨中Gli2及PCNA的表达及其变化规律,在细胞学水平上探讨功能矫治器的作用机理,为临床上功能矫治的使用提供确切的实验依据。方法:选用4周龄健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠70只,体重约90克,随机等量分为实验组和对照组,组内根据实验周期(1、3、7、14、21、28和35天)分为7组(每组5只),共14组。适应性饲养一周后,实验组利用3M玻璃离子将自制下颌前伸斜面导板矫治器粘固于大鼠上切牙,通过链状橡皮圈经鼻上颌复合体与两侧口外弓连接,使得斜面导板获得稳定的固位,并将大鼠四肢用医用橡皮膏包裹以有效地防止大鼠前爪对装置的破坏及损伤面部组织,矫治器24h戴用;对照组不做任何实验操作。所有动物均以软食饲养,自由饮水,同一环境下饲养至实验结束。实验后1、3、7、14、21、28、35天分别取材,常规固定,脱钙,脱水,包埋。石蜡切片后进行常规HE染色观察髁突组织学变化;SP免疫组化方法检测Gli2及PCNA的表达,采用美国Media Cybernetics公司Image-Pro Plus多功能真彩色细胞图象分析管理系统进行免疫组化染色评分,以IHS值表示染色强度。所有数据结果均应用SPSS19.0统计软件进行处理,统计分析时实验组与对照组组间比较采用t检验,组内比较采用单因素方差分析,P0.05为有统计学差异,检验水准α=0.05。PCNA实验组与Gli2实验组进行双变量相关分析。结果:1大体观察:实验组大鼠上下颌前牙呈对刃或反He关系,下颌处于前伸状态,矫治器摘除后,下颌不能后退。对照组大鼠前牙覆盖约3mm。2髁突形态学变化:对照组随着观测时间的延长,髁突软骨主要表现为厚度变薄,其中软骨中部和后部的变化更为显著,呈现增龄性的变化;实验组自实验第3天时,髁突软骨各层组织变厚,细胞数量增多,髁突中后份有明显变化,而前份不明显。之后到21天时,髁突软骨各层逐渐稳定,钙化软骨层较对照组仍明显增厚,并可见处于分化末期的软骨细胞,成骨细胞以及大量原始骨小梁和发育不完全的骨髓腔。3 Gli2及PCNA表达水平及分布:空白对照(PBS代替一抗)组未见阳性着色颗粒。对照组髁突软骨中仅肥大层少量细胞Gli2表达阳性,且其表达逐渐降低,第28天以后表达稳定在极低的水平,组间比较差异无统计学意义(P0.01);实验组第3天时,髁突软骨中Gli2表达增强,IHS=15.67±3.51与对照组IHS=6.00±1.00存在显著差异(P0.05),第7天时,实验组IHS=41.33±3.06阳性表达显著增强,与对照组IHS=5.67±1.53有明显差异(P0.01);第14天,实验组IHS=99.00±6.00阳性表达持续增强,与对照组IHS=5.67±2.08差异明显(P0.01),第21天,实验组IHS=44.67±6.43,大部分样本阳性表达细胞开始减少,但与对照组IHS=5.00±1.73相比仍有显著差异(P0.05);第28天,实验组IHS=17.33±6.11,对照组IHS=4.33±1.53,差别无计学意义(P0.05);第35天,髁突软骨Gli2表达回落至极低水平,实验组IHS=7.33±2.08,与对照组IHS=4.33±1.54相比仍无统计学差异(P0.05)。实验组第3天时,髁突软骨中PCNA表达增强,IHS=49.67±13.50与对照组IHS=7.33±1.15显著差异(P0.01),第7天时,实验组IHS=124.00±7.55阳性表达显著增强,与对照组IHS=9.00±2.00比较有明显差异(P0.01);第14天,实验组IHS=108.33±8.50阳性表达略有减弱,但与对照组IHS=8.67±0.58差异仍明显(P0.01),第21天,实验组IHS=34.00±15.87,大部分样本阳性表达细胞开始减少,与对照组IHS=7.67±1.53相比差异不明显(P0.05);第28天,实验组与对照组差别仍无统计学意义(P0.05);第35天,髁突软骨PCNA表达回落至极低水平,实验组IHS=7.33±2.08,与对照组IHS=6.67±1.15相比无统计学差异(P0.05)。PCNA实验组与Gli2实验组相关系数为0.715,P0.01,有统计学意义。结论:1大鼠下颌功能前伸过程中,Gli2参与髁突软骨细胞的增殖分化以及新骨形成的整个过程。2 Gli2参与了大鼠髁突软骨骨改建过程中机械外力-生物化学信号的转导过程。
【关键词】：下颌功能前伸 髁突改建 Gli2 PCNA 生长期大鼠
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R782
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 英文缩写12-13
• 前言13-14
• 材料与方法14-19
• 结果19-22
• 附图22-36
• 附表36-37
• 讨论37-41
• 结论41
• 参考文献41-45
• 综述45-58
• 参考文献51-58
• 致谢58-59
• 个人简历59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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2 张红;殷新民;吴凤鸣;吴煜农;顾卫平;谢兰生;;牙尖交错位紧咬时颞下颌关节接触特征及应力分布的三维有限元研究[J];口腔医学;2007年12期

3 成薇婷;田德英;许凯;;Gli2在原发性肝细胞癌中的表达及与Cyclin D1、p21的关系[J];华中科技大学学报(医学版);2008年04期

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本文编号：293883