纺锤体和动粒关联蛋白-1基因在□腔鳞癌中的表达及其致癌机制研究

发布时间：2021-01-09 18:29

　　口腔肿瘤中最常见的恶性肿瘤是口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）。目前,手术切除仍是主要的治疗方式。但大多数患者是在晚期才被诊断,且预后较差。其主要原因在于口腔鳞状细胞癌容易复发和转移。口腔鳞状细胞癌在发生转移与其具有快速增殖的能力有着密切的关系。因此,有效地抑制肿瘤细胞的恶性增殖是治疗口腔鳞癌的关键。有丝分裂过程中,染色体分裂异常是产生遗传不稳定性继而导致肿瘤发生和进展的重要原因。纺锤体和动粒关联蛋白（Spindle and Kinetochroe Associated complex SKA）,在有丝分裂中期使纺锤体微管稳定地附着在动粒（kinetochore, KT）上,从而确保有丝分裂的顺利完成。SKA蛋白复合体包含SKA1、SKA2和SKA3三个亚基。已有研究表明,SKA2与SKA3均与肿瘤的发生发展有关,然而,关于SKA1在肿瘤恶性进展中的调节功能尚无报道。本文旨在研究SKA1是否是调节口腔鳞癌的恶性增殖的一个关键分子。本课题首先收集并采用免疫组化方法研究了SKA1基因在36例口腔鳞癌组织中和31例非肿瘤组织或癌旁组织中的表... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：113 页

【学位级别】：博士

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目录
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 口腔癌组织中SKA1的表达及其临床意义
    1. 前言
    2. 材料与方法
        2.1 患者来源及临床资料
        2.2 材料和试剂
        2.3 主要仪器
        2.4 试剂配置
        2.5 实验方法
            2.5.1 标本处理
            2.5.2 免疫组化染色
            2.5.3 免疫组化结果判断
        2.6 统计学方法
    3 结果
    4 讨论
第二部分 携带SKA1基因短发夹RNA慢病毒载体的构建及其对靶基因的沉默的研究
    1. 前言
    2. 材料与方法
        2.1 质粒、菌株和包装细胞、
        2.2 材料和试剂
        2.3 主要仪器和耗材
        2.4 溶液配制
        2.5 方法
            2.5.1 SKA1-LOF质粒载体的构建
            2.5.2 SKA1-GOF慢病毒载体的构建及鉴定
            2.5.3 细胞转染
            2.5.4 Western blot筛选可有效干扰目的基因表达的慢病毒质粒
            2.5.5 慢病毒的包装
            2.5.6 滴度测定
    3 结果
        3.1 SKA1 shRNA慢病毒载体鉴定
            3.1.1 pFH-L载体的双酶切
            3.1.2 PCR法鉴定SKA1-LOF慢病毒载体
            3.1.3 SKA1-LOF慢病毒载体的测序鉴定
        3.2 SKA1-GOF载体的测序鉴定
            3.2.1 PCR产物的酶切鉴定
            3.2.2 阳性克隆的PCR鉴定
        3.3 Western blot验证靶点
        3.4 shRNA-SKA1的包装及滴度测定
    4 讨论
第三部分 慢病毒介导RNA干扰口腔鳞癌细胞SKA1基因对细胞恶性增殖和周期进展的影响
    1. 前言
    2. 材料与方法
        2.1 细胞株
        2.2 材料和试剂
        2.3 主要仪器
        2.4 试剂配置
        2.5 实验方法
            2.5.1 慢病毒感染
            2.5.2 Western blot
            2.5.3 MTT法测量生长曲线
            2.5.4 克隆形成实验
            2.5.5 流式细胞仪（FACS）检测细胞周期
        2.6 统计学方法
    3 结果
        3.1 慢病毒感染效率鉴定
        3.2 SKA1基因的沉默效率验证
        3.4 SKA1沉默对口腔鳞癌细胞增殖的影响
        3.5 SKA1沉默对口腔鳞癌细胞体外克隆形成能力的影响
        3.6 流式细胞仪检测细胞周期
    4 讨论
第四部分 表达谱芯片研究SKA1调节口腔鳞癌细胞的恶性增殖的分子机制
    1. 前言
    2. 材料与方法
        2.1 细胞株
        2.2 材料和试剂
        2.3 主要仪器
        2.4 试剂配置
        2.5 实验方法
            2.5.1 慢病毒感染
            2.5.2 总RNA的抽提
            2.5.3 cDNA探针制备
            2.5.4 芯片杂交
            2.5.5 qPCR验证差异表达基因
    3 结果
        3.1 基因芯片结果
            3.1.1 RNA样品质控信息
            3.1.2 基因功能聚类（Gene Ontology,GO）分析
        3.2 qPCR验证结果
    4 讨论
参考文献
结论
综述
    参考文献
致谢
攻读学位期间发表的论文
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：2967176