C反应蛋白基因多态性及牙周致病菌在慢性牙周炎和冠心病相关性中研究
发布时间：2021-01-12 13:39
目的：（1）探讨C反应蛋白（C reactive protein, CRP）基因（+1059G>C rs1800947,+1444C>Trs1130864）的基因多态性、单倍型与慢性牙周炎（chronic periodontitis,CP）、冠心病（coronary heartdisease, CHD）、慢性牙周炎伴冠心病（CP+CHD）易感性的关系；（2）探讨慢性牙周炎与冠状动脉粥样硬化性心脏病（以下简称冠心病）发病的相关性机制。方法：（1）中重度CP患者100例、CHD患者98例、中重度CP伴CHD患者92例与125例健康对照者（CONTROL）的烦黏膜拭子,提取DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法对+1059G>Crs 1800947,+1444C>Trs1130864位点的基因分型,及对CP伴CHD组和健康对照组测序检测2个多态性位点单倍型；（2）对合并组患者随机抽取38例收集冠状动脉粥样硬化斑块和龈下菌斑,采用Chelex-100法提取细菌DNA,以实时荧光定量检测（RTQ-PCR）法检测冠状动脉粥样硬化斑块和龈下菌斑中具核梭杆菌（Fn）、...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
+10596>Crs1800947扩增产物GG型
对照组与cP伴cHD组单倍型检测所用PcR产物分析，PCR产物 780bp基因组DNA抽提产物经质量分数1%琼脂糖凝胶电泳分析证实，产物基本完整，无断裂，纯度较高。见图3。产物测序结果见图4，图5。1.3四组基因多态性比较由于 rs1800947的CC基因型纯合子和 rs1800947的TT基因型的纯合子检出较少，故在统计分析时分别将CC基因型与GC基因型合并后再与GG基因型比较，CT基因型与TT基因型合并后与再CC基因型比较。并且分别比较 rsl800947位点的G基因型与C基因型在对照组与其余各组差异， rs1130864位点C基因型和T基因型在对照组与其余各组的差异。比较分析结果::51800947和rSll30864基因多态性位点在4组统计学均无统计学意义， rsl130864多态性位点在CP伴CHD组与健康对照组间比较P值最小 (0.086，0.065)是否提示差异有扩大趋势值得进一步研究。表4:健康对照组与合并组基因多态性比较 :rs1800947的CC+GC基因型与GG基[Xl型比较，z’=0.959，作0.320
2.2荧光定量PCR检测具核梭杆菌(FN)福塞斯坦纳菌(TF)及内参基因标准品对引物浓度、退火温度、延伸步骤等进行优化，确定最佳的实时荧光定量PCR的反应体系(25闪)为:SYBRGreenl荧光染料混合物12.5川，上游及下游引物各0.5州，重组质粒DNAZ州，无菌去离子水9.5闪。反应条件为:95℃2分钟，95℃10秒钟，60℃40秒钟，进行40个循环。标准品可以得到较好的扩增曲线、标准曲线和融解曲线，标准曲线显示线性关系良好(内参基因总菌165v3区相关系数对二0.997，目的基因FN相关系数扩一0.997，目的基因TF相关系数对一0.995)，可以在宽广的范围内进行准确定量;扩增效率较好(内参基因总菌165V3区:E二101%，目的基因FN:E一101%，目的基因TF:E=95%)，目的基因融解曲线峰形单一，说明反应特异性好。总菌165通用引物357F、518R扩出的基因熔解曲线较乱，而且有少量标本有双峰，这是因为样品中有各种不同菌，不同菌的165V3区基因序列有差别，造成总菌357F、518R
【参考文献】：
期刊论文
[1]兔牙周炎与动脉粥样硬化结合模型建立及研究[J]. 张源明,周晓欢,钟良军,高云,倪佳,徐隽. 中华实用诊断与治疗杂志. 2010(05)
[2]血清C反应蛋白在大鼠慢性牙周炎合并动脉粥样硬化模型中的表达[J]. 倪佳,张源明,徐隽,钟良军,史芳川,周晓欢. 基础医学与临床. 2009(02)
[3]C反应蛋白基因多态性及冠心病相关性研究进展[J]. 翁良,赵昕. 中国实验诊断学. 2008(08)
[4]冠心病患者的牙周状况与hs-CRP和HDL-C的相关性研究[J]. 周骢,聂敏海,李家富,胡佳. 实用口腔医学杂志. 2008(03)
[5]牙周疾病与冠状动脉性心脏病的关系[J]. 欧阳翔英. 北京大学学报(医学版). 2008(01)
[6]冠心病和慢性牙周炎相关性研究[J]. 张源明,钟良军,何秉贤,聂晶,王璇,李文超. 中华流行病学杂志. 2006(03)
[7]牙菌斑与全身疾病的关系[J]. 杨懋彬,周学东. 国外医学.口腔医学分册. 2005(01)
[8]伴放线放线杆菌flp-1基因遗传多样性分析[J]. 刘冬宇,王者玲,王明荣,徐昕,蔡岩,杨圣辉. 北京口腔医学. 2004(01)
[9]PCR直接检测龈下菌斑主要可疑牙周致病菌[J]. 王者玲,岗本公彰,杨圣辉,前田伸子,李金陆,母瑞红,刘颍. 中国微生态学杂志. 2003(02)
[10]牙周病与冠心病的相关性研究[J]. 张卫东. 国外医学.口腔医学分册. 2002(04)
本文编号：2972948
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
+10596>Crs1800947扩增产物GG型
对照组与cP伴cHD组单倍型检测所用PcR产物分析，PCR产物 780bp基因组DNA抽提产物经质量分数1%琼脂糖凝胶电泳分析证实，产物基本完整，无断裂，纯度较高。见图3。产物测序结果见图4，图5。1.3四组基因多态性比较由于 rs1800947的CC基因型纯合子和 rs1800947的TT基因型的纯合子检出较少，故在统计分析时分别将CC基因型与GC基因型合并后再与GG基因型比较，CT基因型与TT基因型合并后与再CC基因型比较。并且分别比较 rsl800947位点的G基因型与C基因型在对照组与其余各组差异， rs1130864位点C基因型和T基因型在对照组与其余各组的差异。比较分析结果::51800947和rSll30864基因多态性位点在4组统计学均无统计学意义， rsl130864多态性位点在CP伴CHD组与健康对照组间比较P值最小 (0.086，0.065)是否提示差异有扩大趋势值得进一步研究。表4:健康对照组与合并组基因多态性比较 :rs1800947的CC+GC基因型与GG基[Xl型比较，z’=0.959，作0.320
2.2荧光定量PCR检测具核梭杆菌(FN)福塞斯坦纳菌(TF)及内参基因标准品对引物浓度、退火温度、延伸步骤等进行优化，确定最佳的实时荧光定量PCR的反应体系(25闪)为:SYBRGreenl荧光染料混合物12.5川，上游及下游引物各0.5州，重组质粒DNAZ州，无菌去离子水9.5闪。反应条件为:95℃2分钟，95℃10秒钟，60℃40秒钟，进行40个循环。标准品可以得到较好的扩增曲线、标准曲线和融解曲线，标准曲线显示线性关系良好(内参基因总菌165v3区相关系数对二0.997，目的基因FN相关系数扩一0.997，目的基因TF相关系数对一0.995)，可以在宽广的范围内进行准确定量;扩增效率较好(内参基因总菌165V3区:E二101%，目的基因FN:E一101%，目的基因TF:E=95%)，目的基因融解曲线峰形单一，说明反应特异性好。总菌165通用引物357F、518R扩出的基因熔解曲线较乱，而且有少量标本有双峰，这是因为样品中有各种不同菌，不同菌的165V3区基因序列有差别，造成总菌357F、518R
【参考文献】：
期刊论文
[1]兔牙周炎与动脉粥样硬化结合模型建立及研究[J]. 张源明,周晓欢,钟良军,高云,倪佳,徐隽. 中华实用诊断与治疗杂志. 2010(05)
[2]血清C反应蛋白在大鼠慢性牙周炎合并动脉粥样硬化模型中的表达[J]. 倪佳,张源明,徐隽,钟良军,史芳川,周晓欢. 基础医学与临床. 2009(02)
[3]C反应蛋白基因多态性及冠心病相关性研究进展[J]. 翁良,赵昕. 中国实验诊断学. 2008(08)
[4]冠心病患者的牙周状况与hs-CRP和HDL-C的相关性研究[J]. 周骢,聂敏海,李家富,胡佳. 实用口腔医学杂志. 2008(03)
[5]牙周疾病与冠状动脉性心脏病的关系[J]. 欧阳翔英. 北京大学学报(医学版). 2008(01)
[6]冠心病和慢性牙周炎相关性研究[J]. 张源明,钟良军,何秉贤,聂晶,王璇,李文超. 中华流行病学杂志. 2006(03)
[7]牙菌斑与全身疾病的关系[J]. 杨懋彬,周学东. 国外医学.口腔医学分册. 2005(01)
[8]伴放线放线杆菌flp-1基因遗传多样性分析[J]. 刘冬宇,王者玲,王明荣,徐昕,蔡岩,杨圣辉. 北京口腔医学. 2004(01)
[9]PCR直接检测龈下菌斑主要可疑牙周致病菌[J]. 王者玲,岗本公彰,杨圣辉,前田伸子,李金陆,母瑞红,刘颍. 中国微生态学杂志. 2003(02)
[10]牙周病与冠心病的相关性研究[J]. 张卫东. 国外医学.口腔医学分册. 2002(04)
本文编号：2972948
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