重组真核表达质粒pVAX1-SPG的构建及表达研究

发布时间：2021-01-15 23:37

　　龋病是一种细菌感染性疾病,其中变异链球菌族细菌是其主要病原菌。主要包括变异链球菌（S.mutans）和远缘链球（S.sobrinus,又称茸毛链球菌、表兄链球菌）。粘附是变异链球菌族细菌致龋的基础,变异链球菌表面蛋白（surface protein antigen, SpaP）和葡聚糖结合蛋白（glucan-binding proteins, Gbp）是变异链球菌重要的粘附毒力因子,参与介导细菌在牙面的粘附,并具有良好的免疫原性,能够诱导机体产生保护性免疫应答。本实验拟将变异链球菌表面蛋白SpaP的P区和葡聚糖结合蛋白Gbp的编码基因spap-P和gbd嵌合到真核表达载体pVAX1中,构建真核重组质粒pVAX1-SPG。并将重组质粒转染哺乳动物细胞观察目的蛋白的表达,为进一步的动物实验研究提供物质基础。方法：本研究共分为两个实验实验一重组真核表达质粒pVAX1-SPG的构建以变异链球菌基因组DNA为模板,PCR扩增变异链球菌表面蛋白P区编码基因spap-P和葡聚糖结合蛋白GbpA的GBD编码基因gbd,分别将目的基因spap-P和曲d定向克隆到真核载体pVAX1中,构建重组质粒pVAX... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

变异链球菌基囚织DN广、

将重组质粒pVAxl一SPG送宝生物(大连)有限公司，使用引物T7、BGHrev对重组质粒进行测序验证。2.结果2.1细菌DNA的鉴定变异链球菌国际标准株UA159经镜检无异常，无污染，基因组DNA抽提产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳均为单一条带，约23kb，证实其完整，无降解。OD26O/OD28O比值均在1.6一1.8之间，说明抽提产物无蛋白质、无酚污染，无洲A污染。浓度在550一850林g单l(图l)。

图4pVAxl一SP酶切产物Fig.4RestrictionendonueleaseofPVAXI一SPl:DL2000Marker2:pVAxl一SP双酶切产物3:人一Hind111Marker图5pVAxl一GG酶切产物Fig.5RestrietionendonueleaseofPVAXI一GGl:入一Hind111Marker2:pVAxl一GG双酶切产物3:DL2000Marker一231子O卜p，一961一655些;1〕l户月王平母一4361bP啥’一23221，一202了b1斗略1甲.ZOCIC.卜p一‘.1OC叫二bp一‘下50bp一SOClbp一一564bp“

【参考文献】：
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博士论文
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本文编号：2979718