SPATA5L1基因在KB细胞上皮间质转化中的生物学意义

发布时间：2017-04-16 08:27

  本文关键词：SPATA5L1基因在KB细胞上皮间质转化中的生物学意义，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究转染SPATA5L1基因后人口腔上皮癌KB细胞株p EX-1-SPATA5L1-KB,以了解高表达SPATA5L1蛋白在上皮细胞-间质转化(EMT)过程中的生物学作用。方法:免疫荧光法激光共聚焦显微镜观察SPATA5L1在KB细胞中的定位,同时通过Western blot方法分别检测KB细胞的核蛋白和浆蛋白,确定SPATA5L1在KB细胞中的表达和定位。Western blot方法检测稳定转染后的p EX-1-SPATA5L1-KB中SPATA5L1蛋白表达量。采用Transwell细胞侵袭实验检测SPATA5L1对KB细胞侵袭能力的改变,扫描电镜观察细胞形态的变化尤其是伪足的变化。利用CCK-8法及18F-FLT掺入法测定转染细胞的增殖能力,并与空转染细胞对照。Western Blot法检测各转染细胞和对照细胞中E-cadherin、N-cadherin及Vimentin等EMT相关标志蛋白的表达水平,检测与Wnt信号通路有关的几个蛋白表达水平。结果:SPATA5L1在KB细胞中主要定位在细胞质中,细胞核中无表达。相比于空转染细胞,稳定转染细胞株p EX-1-SPATA5L1-KB中目的基因SPATA5L1具有高表达,其侵袭能力明显增加,且细胞形态由正多边形变为纺锤体形,并且细胞表面丝状伪足明显增长且数量增多,其细胞增殖能力增强。SPATA5L1在KB细胞中过表达能够抑制上皮细胞标志物E-cadherin的表达,并促进间质细胞标志物N-cadherin和Vimentin的表达。Wnt信号通路相关蛋白Dvl2、Dvl3、LRP6表达量显著升高,Axin1的表达量显著降低。结论:SPATA5L1基因编码的蛋白在KB细胞中定位于细胞质中。SPATA5L1过表达可以促进口腔上皮癌细胞EMT的发生,增强其增殖和侵袭能力。SPATA5L1诱发KB细胞发生EMT的分子机制可能是通过调节Wnt信号通路来实现的。
【关键词】：KB细胞 SPATA5L1 EMT 肿瘤增殖 侵袭
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.55;R739.8
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 引言8-11
• 第一部分 SPATA5L1蛋白在KB细胞中的定位11-21
• 一、实验材料11-13
• 二、实验方法13-18
• 三、结果18-19
• 四、讨论19-21
• 第二部分 SPATA5L1对KB细胞增殖能力和侵袭能力的影响21-32
• 一、实验材料21-22
• 二、实验方法22-25
• 三、结果25-29
• 四、讨论29-32
• 第三部分 SPATA5L1促进.腔上皮癌细胞EMT发生的确定及其分子机制32-42
• 一、实验材料32-34
• 二、实验方法34-35
• 三、结果35-37
• 四、讨论37-42
• 结论42-43
• 参考文献43-50
• 综述：上皮-间质转化的发生及其生物标志物50-71
• 参考文献60-71
• 攻读硕士学位出版或公开发表的文章71-72
• 致谢72-74

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 马飞;蒋轩;喻嵘;吴勇军;;Wnt信号通路在糖尿病肾病研究中的作用探讨[J];医学研究生学报;2013年12期

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本文编号：310436