口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血miRNA的表达及意义

发布时间：2017-04-20 21:24

  本文关键词：口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血miRNA的表达及意义，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:检测分析口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血中mi RNA表达谱,筛选出口腔颌面部鳞状细胞癌差异性血清mi RNA,对筛选出的mi RNA进行选择性验证,寻找特异性表达的血清mi RNA,为口腔颌面部鳞状细胞癌的早期诊断、早期治疗以及预后判定提供实验依据和理论基础。方法:1按照外周血采集规范收集3例口腔颌面部鳞状细胞癌患者的血液标本作为实验组。实验组患者未进行任何特殊治疗,均有组织病理学诊断依据,排除其它系统肿瘤或和口腔转移性肿瘤。对照组采用3例正常人群的外周血。于清晨空腹抽取外周静脉血2m L,抗凝处理,-80℃保存。血液标本在室温下放置时间不超过1h。2使用RNA提取试剂盒对标本进行总RNA的提纯。3进行RNA浓度和纯度的检测。4稀释样本使各其RNA浓度相等,按照试剂盒的说明书进行RNA逆转录。5 96孔板选择human serum plasma mirna pcr array试剂盒,进行q RT-PCR反应进行差异性mi RNA的筛选。6选取外周血hsa-mi R-222-3p、hsa-mi R-423-5p进行验证,扩大标本量至每组30例;提取总RNA,进行RNA浓度和纯度的检测。7稀释样本使各样本的RNA浓度相等,进行q RT-PCR反应。8结果判定及统计学分析mi RNA的表达水平差异用2-△△C T来表示,整理每个基因的CT值,再用每组自身的目的基因CT值减去自身内参基因CT值,即为△CT,公式为△CT=CT(目的基因)-CT(内参基因),求其均值;其中C.39作为内参。再用本次实验中实验组的△CT减去对照组的△CT,公式为△△CT=△CT(实验组)-△CT(对照组)。Fold Change值为2-△△C T,求其均值。Fold Change大于2表明实验组中mi RNA表达水平较对照组的上调且有意义。Fold Change小于0.5表明实验组中mi RNA表达水平较对照组的下调且有意义。以上所有统计学方法均在Excel软件上进行。利用相对定量的方法来检测hsa-mi R-222-3p、hsa-mi R-423-5p在口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血中表达水平的差异。mi RNA的表达水平差异用RQ=2-△△C T来表示。两种mi RNA在口腔颌面部鳞状细胞癌与正常组外周血中的表达水平的以均值±标准差(x±SD)表示,采用完全随机的两独立样本的t检验比较各组件差异,P0.05为显著性差异。以上所有统计学方法均在SPSS13.0统计软件上进行。结果:1口腔颌面部鳞癌患者外周血mi RNA高于正常人外周血mi RNA且有意义的mi RNA有8个(Fold Change2)。2口腔颌面部鳞癌患者外周血mi RNA低于正常人外周血mi RNA且有意义的mi RNA有18个(Fold Change0.5)。3 30例实验组的hsa-mi R-222-3p表达水平平均值为5.587±0.218,30例对照组的表达水平平均值为0.972±0.177。口腔颌面部鳞状细胞癌组的hsa-mi R-222-3p表达水平较正常组中的表达水平间差异有统计学意义(P0.05)。4 30例实验组的hsa-mi R-423-5p表达水平平均值为0.431±0.066,30例对照组的表达水平平均值为1.206±0.195。口腔颌面部鳞状细胞癌组的hsa-mi R-423-5p表达水平较正常组中的表达水平间差异有统计学意义(P0.05)。结论:1在口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血中mi RNA的表达水平较正常组存在差异,推测外周血mi RNA的表达水平与口腔颌面部鳞状细胞癌的发生有关。2 hsa-mi R-222-3p在口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血中高表达;hsa-mi R-423-5p在口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血中低表达。推测hsa-mi R-222-3p、hsa-mi R-423-5p有可能成为诊断口腔颌面部鳞状细胞癌的生物标记物。
【关键词】：外周血miRNA qRT-PCR 口腔颌面部鳞状细胞癌 miR-222 mi R-423 生物标记物
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.8
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-12
• 引言12-13
• 第一部分 筛选口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血表达差异miRNA13-27
• 前言13
• 材料与方法13-17
• 结果17-18
• 附表18-20
• 讨论20-23
• 小结23-24
• 参考文献24-27
• 第二部分 外周血hsa-miR2223p、hsa-miR4235p在口腔颌面部鳞状细胞癌中特异性表达的验证27-37
• 前言27
• 材料与方法27-29
• 结果29-30
• 附图30-31
• 附表31-34
• 讨论34-35
• 小结35-36
• 参考文献36-37
• 结论37-38
• 综述 miRNA的研究进展及其与口腔颌面部鳞状细胞癌的关系38-54
• 参考文献46-54
• 致谢54-55
• 个人简历55

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本文编号：319541