未折叠蛋白反应在增强口腔鳞癌药物治疗敏感性中的作用

发布时间：2017-04-21 12:11

  本文关键词：未折叠蛋白反应在增强口腔鳞癌药物治疗敏感性中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 1.探讨内质网应激相关蛋白GRP78在口腔鳞癌组织中的表达与临床病理特征及预后间的关系。 2.探讨口腔鳞癌细胞对化疗药物的敏感性与内质网应激相关蛋白GRP78表达的关系。 方法： 1.统计学分析GRP78的表达与口腔鳞癌患者临床病理特征及预后关系； 2. MTT法探讨奥沙利铂、衣酶素以及二者合用24、48、72h后对人口腔鳞癌KB细胞存活率的影响，以明确其剂量-效应关系； 3.集落克隆法探讨奥沙利铂、衣酶素单独及联合使用对人口腔鳞癌KB细胞集落克隆形成的抑制作用； 4. PI单染，检测奥沙利铂、衣酶素以及二者合处理人口腔鳞癌细胞KB24h后对诱导人口腔鳞癌细胞凋亡的影响； 5. Western blot法探讨奥沙利铂、衣酶素以及二者合用处理人口腔鳞癌细胞KB24h后对人口腔鳞癌细胞KB GRP78、Caspase-12表达的影响； 6. Caspase-3活性试剂盒检测Caspae-3活性； 7. siRNA法下调GRP78后，Western blot法检测口腔鳞癌细胞中GRP78蛋白的表达，PI单染检测下调GRP78后奥沙利铂对人口腔鳞癌细胞KB凋亡的影响。 结果： 一、GRP78在口腔鳞癌患者组织中的表达与临床病理特征、预后关系的相关性 1. GRP78和口腔鳞癌患者临床病理特征间的关系 GRP78的阳性表达与患者的肿瘤直径、肿瘤大小、淋巴结转移、远距离转移、临床分期、病理分化程度等因素有关且具有统计学意义。GRP78的表达与年龄、性别、抽烟、饮酒等因素无关。 2. GRP78阳性表达的患者预后的存活率低于GRP78阴性表达的患者。 3. Cox模型分析年龄、远距离转移、GRP78阳性表达是影响口腔鳞癌患者生存期的风险因子。 二、衣霉素联合奥沙利铂对人口腔鳞癌KB细胞增殖及凋亡的影响 1.衣霉素增强奥沙利铂对人口腔鳞癌KB细胞增殖的抑制作用 衣霉素单独作用于人口腔鳞癌KB细胞24、48、72h后，口腔鳞癌KB细胞存活率为90.37%、89.44%、88.91%；奥沙利铂单独作用于人口腔鳞癌KB细胞24、48、72h后，口腔鳞癌KB细胞存活率分别为62.36%、47.54%、40.47%。衣霉素与奥沙利铂联合使用作用与人口腔鳞癌KB细胞24、48、72h后，，口腔鳞癌KB细胞的存活率为50.78%、37.77%、23.24%，结果有统计学差异(P 0.05，见图1)。 2.衣霉素增强奥沙利铂对人口腔鳞癌KB细胞集落克隆形成的抑制作用 0.25μmol/L衣霉素、0.125μmol/L奥沙利铂单独以及联合使用作用于人口腔鳞癌KB细胞，结果表明，衣霉素在低浓度即可明显抑制人口腔鳞癌KB细胞的集落克隆形成，联合使用时可提高奥沙利铂对人口腔鳞癌KB细胞集落克隆形成的抑制作用。 3.衣霉素增强奥沙利铂诱导人口腔鳞癌KB细胞凋亡的作用 0.5μmol/L衣霉素作用于人口腔鳞癌KB细胞48h后，人口腔鳞癌KB细胞的凋亡率为8.3%。0.25μmol/L奥沙利铂作用于人口腔鳞癌KB细胞48h后，人口腔鳞癌KB细胞凋亡率为12.2%。0.5μmol/L衣霉素与0.25μmol/L奥沙利铂联合作用于人口腔鳞癌KB细胞48h后，诱导人口腔鳞癌KB细胞的凋亡率为26.2%。 4.衣霉素增强奥沙利铂诱导口腔鳞癌KB细胞的Caspase-3激活作用 低浓度衣霉素作用人口腔鳞癌KB细胞后，Caspase-3的活性并未出现明显提高，但衣霉素与奥沙利铂联合使用时可明显提高奥沙利铂对人口腔鳞癌KB细胞Caspase-3的激活作用。 5.衣霉素可提高奥沙利铂诱导的人口腔鳞癌KB细胞的GRP78、Caspase-12和Caspase-3蛋白的表达 衣霉素可诱导人口腔鳞癌KB细胞GRP-78的表达，衣霉素联合奥沙利铂作用于人口腔鳞癌KB细胞后，可诱导GRP-78更强烈的的表达。衣霉素、奥沙利铂联合使用使得Caspase-12、Caspase-3蛋白的表达高于单独用药组。 三、下调GRP78具有增强奥沙利铂诱导口腔鳞癌细胞凋亡的敏感性 1.SiRNA转染效率的检测 将不同序列的siRNA-GRP78和空质粒转染进入口腔鳞癌细胞KB中，用Western blot法检测了口腔鳞癌细胞KB中GRP78的表达，与对照转染空质粒组相比，转染siRNA-GRP78组中GRP78表达明显降低。 2.SiRNA转染对奥沙利铂诱导细胞凋亡增敏作用 将口腔鳞癌细胞KB进行转染下调GRP78后，奥沙利铂对口腔鳞癌细胞KB凋亡率明显升高，与单用奥沙利铂组、转染空质粒组相比，具有统计学意义。结论： 1.口腔鳞癌组织中GRP78在蛋白水平上的表达量明显高于其在正常组织中的表达量 2.口腔鳞癌组织中GRP78在蛋白水平上的表达量与临床病理特征、预后情况存在相关性，可以作为一个潜在口腔鳞癌症标记物用以判断口腔鳞癌的恶性程度以及预测其预后。 3.急性或过度内质网应激对肿瘤细胞的促凋亡作用大于保护作用。 4.下调GRP78后，化疗药物诱导口腔鳞癌细胞凋亡率明显上升，由此证明GRP78在口腔鳞癌中具有的保护作用。
【关键词】：口腔鳞癌 奥沙利铂 衣酶素 siRNA 内质网应激 GRP78 Caspase-3 Caspase-12 凋亡 免疫组化 预后 干扰RNA
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.8
【目录】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 引言11-13
• 材料与方法13-23
• 1. 材料与仪器13-14
• 2. 实验方法14-22
• 2.1 免疫组织化学方法检测 GRP78 的表达14-15
• 2.2 细胞培养15-16
• 2.3 MTT 法检测细胞存活率16-17
• 2.4 集落克隆形成实验17
• 2.5 PI 染色检测凋亡17-18
• 2.6 Capases-3 活性检测18-19
• 2.7 siRNA 转染19
• 2.8 免疫印迹法检测相关蛋白的表达19-22
• 3. 统计学处理22-23
• 结果23-31
• 1 GRP78 在口腔鳞癌患者中的表达与临床病理特征、预后关系的相关性23-26
• 2 衣霉素联合奥沙利铂对 KB 细胞增殖及凋亡26-29
• 3 下调 GRP78 具有增强奥沙利铂诱导口腔鳞癌细胞凋亡的敏感性29-31
• 讨论31-35
• 结论35-36
• 参考文献36-39
• 致谢39-40
• 附录 A 英中文术语缩略语对照表40-41
• 附录 B 主要试剂配制方法41-44
• 附录 C 个人简历及发表论文44-45
• 附录 D 综述45-53
• 参考文献50-53

【共引文献】

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本文编号：320319