茶多酚对人牙槽骨成骨细胞增殖以及成骨细胞相关基因表达的影响

发布时间：2017-04-25 09:07

  本文关键词：茶多酚对人牙槽骨成骨细胞增殖以及成骨细胞相关基因表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过观察不同浓度茶多酚(tea polyphenols,TP)对健康人牙槽骨成骨细胞(human alveolar osteoblasts,HAOB)增殖以及成骨细胞(osteoblasts,OB)相关基因Runt相关转录因子2(runt related transcription factor 2,RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)、组织非特异性碱性磷酸酶(tissue-nonspecific alkaline phosphatase,TNAP)、Ⅰ型胶原蛋白α1链(collagen typeⅠalpha 1,COL1A1)、骨钙素(osteocalcin,OCN)和骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)基因表达的影响,研究TP对健康HAOB增殖以及OB相关基因的影响,寻求一种简单安全可靠的方法保持牙周组织健康,甚至修复已破坏的牙周组织,为进一步研究TP对口腔疾病和骨代谢相关疾病的治疗提供实验基础和理论依据。方法:1.通过改良的预消化组织块培养法体外培养健康HAOB,进行形态学观察,并采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)偶氮偶联法和细胞茜素红钙染色法进行细胞鉴定;2.采用细胞增殖—毒性检测试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)检测不同浓度TP对健康HAOB增殖的情况;3.采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ PCR)检测OB相关基因RUNX2、OSX、TNAP、COL1A1、OCN和BMP2基因的表达情况。结果:1.应用改良的预消化组织块培养法体外培养健康HAOB,约5天左右可见HAOB从骨粒边缘游出,多为三角形和梭形、体积较大、椭圆形单核、见1~3个核仁、无接触抑制等形态特征符合OB;ALP偶氮偶联法鉴定达90%的细胞阳性表达;细胞茜素红钙染色法鉴定呈阳性。2.CCK-8结果表明:48 h时各浓度TP对HAOB均有明显促进细胞增殖的作用(P0.05),而且比24 h和72 h促进效果更佳;24 h、48 h和72 h时均在100μg/ml TP作用下对细胞增殖的促进效果更好(P0.05);24 h和72 h时在低浓度TP作用下促进作用不显著,甚至在102μg/ml TP影响下出现抑制作用(P0.05);在10-4μg/ml~100μg/ml TP浓度范围内呈浓度依赖性促进细胞增殖。3.RUNX2的相对表达量与实验第二部分促进HAOB的增殖情况基本吻合;OSX、COL1A1、OCN和BMP2在72 h时1.0μg/ml TP组的相对表达量较24 h和48 h时有所增高;COL1A1和OCN相对表达量的趋势类似。结论:采用改良的预消化组织块培养法可以成功体外培养出HAOB;不同浓度TP对HAOB增殖的影响不同,在10-4μg/ml~100μg/ml(0.0001μg/ml~1μg/ml)TP浓度范围内促进细胞增殖呈浓度依赖性,尤其100μg/ml(1μg/ml)TP比其他浓度的促进细胞增殖作用更强,但随着浓度增加会出现抑制现象,并且在48 h时促进作用比24 h和72 h时效果更佳;TP对OB的增殖可能与RUNX2的表达呈正相关,而且72 h时在1.0μg/ml(1μg/ml)TP的影响下,TP可以促进OSX、COL1A1、OCN和BMP2的表达增加。
【关键词】：茶多酚 人牙槽骨成骨细胞 Runt相关转录因子2 成骨细胞特异性转录因子 骨形成蛋白2
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781
【目录】：

• 中英缩略词对照表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 第一部分:人健康牙槽骨成骨细胞的培养及鉴定12-19
• 第二部分:茶多酚对人牙槽骨成骨细胞增殖的影响19-22
• 第三部分:茶多酚对成骨细胞相关基因表达的影响22-38
• 讨论38-47
• 结论47-48
• 参考文献48-51
• 综述51-61
• 参考文献57-61
• 致谢61-63
• 作者简介63-64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：326018