联合应用牙本质基质蛋白1和骨形态蛋白1促进比格犬上颌窦内成骨

发布时间：2022-01-05 17:45

　　目的体外实验探究骨形态蛋白1（Bone morphogenic protein 1,BMP1）在牙本质基质蛋白1促进比格犬骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中发挥的作用,以及通过比格犬动物实验模型检测携带有牙本质基质蛋白1和骨形态蛋白1目的基因的比格犬骨髓间充质干细胞复合骨替代材料在比格犬上颌窦区域的成骨效能。研究通过基因修饰手段,利用犬骨髓间充质干细胞（Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）过表达骨形态蛋白1（Bone morphogenic protein 1,BMP1）促进牙本质基质蛋白1（Dental matrix protein 1）水解,提高犬上颌窦底提升术中矿化成骨的可行性。方法选用12只10.15±3.5Kg比格犬,使用密度梯度离心法分离培养犬BMSCs,流式细胞仪鉴定干细胞属性。通过检测碱性磷酸酶（ALP）活性验证不同比例牙本质基质蛋白1和骨形态蛋白1对BMSCs体外成骨的影响,使用kit-8细胞计数试剂盒检测实验对于细胞增殖的影响。构建携带有牙本质基质蛋白1和骨形态蛋白1目的基因的腺病毒载体,分别携带有樱桃红色荧光基因片段和绿色荧光基因... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

原代犬骨髓间充质干细胞传代后培养镜下形态

安徽医科大学硕士学位论文264.2流式细胞术检测犬骨髓间充质干细胞发现细胞表面标记物CD44、CD90表达呈阳性图2流式细胞术鉴定犬骨髓间充质干细胞犬骨髓间充质干细胞培养，收集P3代bMSCs经抗体孵育后进行流式细胞术上机分析，结果分析可见CD44+细胞所占比例为99.83%、CD90+细胞为91.75%（图2）。符合犬骨髓间充质干细胞特性，实验培养的细胞可用于后续实验模型。4.3检测显示两种蛋白直接作用于BMSCs后的碱性磷酸酶活性升高，对细胞增殖无明显影响探索两种蛋白作用于犬骨髓间充质干细胞后对细胞向成骨细胞分化的影响，用两种不同浓度的蛋白质单独或组合刺激细胞。将蛋白质与细胞共培养7天后，定量碱性磷酸酶检测试剂盒检测，分析ALP活性。（1）不同浓度的BMP1蛋白对BMSCs的成骨诱导作用。设置不同浓度梯度BMP1的蛋白共培养组，结果表明，最佳的BMP1浓度为5μg/ml，此时BMSCs的碱性磷酸酶活性值最高（图3）。

安徽医科大学硕士学位论文27图3不同浓度的BMP1蛋白对BMSCs的成骨诱导作用（**与对照组相比，P<0.01）（2）不同浓度的DMP1蛋白对骨髓间充质干细胞的成骨诱导作用。设置不同浓度梯度的DMP1蛋白共培养组，结果表明，最佳的DMP1浓度为4μg/ml，此时BMSCs的碱性磷酸酶活性值最高（图4）。图4不同浓度的DMP1蛋白对骨髓间充质干细胞的成骨诱导作用（**与对照组相比，P<0.01）（3）选用BMP1与DMP1的空白组、半量最佳浓度组和最佳浓度组进行组合，加入BMSCs的培养液中，使用碱性磷酸酶试剂盒检测。当BMP1浓度为5μg/ml，DMP1浓度为4μg/ml时，碱性磷酸酶活性最高。一定浓度下碱性磷酸酶活性随


本文编号：3570795