pEGFP-N1/Igf1质粒对大鼠牙囊细胞增殖及分化影响的初步研究

发布时间：2022-01-06 10:49

　　目的：构建真核表达载体pEGFP-N1/Igf1，Igf1与EGFP融合表达。通过脂质体介导pEGFP-N1/Igf1转染SD大鼠牙囊细胞，分析其对细胞增殖及分化效应的早期影响，为Igf1基因在牙周组织工程修复与再生中的应用提供参考。方法：1.根据SD大鼠Igf1基因在GeneBank中的序列设计引物。巢氏PCR扩增出目的基因，与pMD-19T载体连接构建pMD-19T/Igf1克隆载体。2.应用限制性内切酶EcoR I及Xho I对pMD-19T/Igf1与pEGFP-N1质粒进行双酶切。使用连接酶Solution I连接酶切后的Igf1片段及pEGFP-N1片段。转化大肠杆菌DH5α后进行PCR、酶切、测序等鉴定。3.原代培养SD大鼠牙囊细胞，细胞传至第四代时进行来源鉴定。实验分组：①空白组、②pEGFP-N1/Igf1组、③pEGFP-N1+脂质体组、④pEGFP-N1/Igf1+脂质体组。4.荧光观察：转染后每隔24h在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光的表达情况，连续观察96h。5.细胞活力检测（MTT法）：96孔板接种细胞，转染后每隔24h检测各组细胞活力，连续检测8d。6. A... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

第四代牙囊细胞生长曲线

第十代牙囊细胞生长曲线

巢式PCR终产物电泳鉴定图

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]rhBMP-2促进兔胫骨延长区骨愈合及骨髓基质干细胞增殖和转化的实验研究[D]. 徐鹏.吉林大学 2004



本文编号：3572313