唾液腺腺样囊性癌来源的外泌体促癌机制的相关研究
发布时间：2022-01-27 09:02
目的:比较腺样囊性癌细胞系与舌鳞状细胞癌细胞分泌的外泌体的差异。探讨人唾液腺腺样囊性癌（Salivary adenoid cystic carcinoma,Sacc）不同细胞系分泌的外泌体（exosomes,EXO）对Sacc细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:使用ExoEasy Maxi Kit试剂盒提取外泌体,通过透射电镜观察外泌体形态及直径,纳米粒子跟踪分析（NTA）鉴定外泌体的粒径及检测外泌体浓度,Western Blotting检测外泌体标志性蛋白的表达及半定量分析其在Sacc-83、Sacc-lm、Tscc-25、Tscca不同细胞系间的表达水平。采用CCK-8法、平板克隆形成实验、细胞划痕及Transwell实验检测外泌体对Sacc细胞增殖、迁移及侵袭能力。结果:透射电镜及NTA检测显示:提取的外泌体直径在30-210nm之间,且形态及粒径大小略有差异;Western Blotting检测到不同细胞系分泌的外泌体特异性标志蛋白CD9,CD63及TSG101呈阳性表达,且具有明显差异（P<0.01）。NTA浓度分析显示腺样囊性癌及舌鳞状细胞癌四种细胞系外泌体分泌量具有明...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
透射电镜观察到四种细胞系来源的外泌体形态及直径(A-D;50000×，80kv)：图A为Sacc-83
新疆医科大学硕士学位论文121.1.3WesternBlotting分析：四种细胞系培养上清中提取的外泌体中均可检测到外泌体特异性标志蛋白CD9,CD63及TSG101表达（图2A）。图2Westernblot法检测四种细胞系来源外泌体中特异性蛋白CD9,CD63andTSG101的表达:图A为Sacc-83,Sacc-lm,Tscc-25,Tscca四种细胞系来源的外泌体特异性蛋白CD9,CD63,TSG101表达水平。图B为不同肿瘤细胞Sacc-83与Tscca来源的外泌体特异性蛋白CD9,CD63,TSG101表达差异（CD9,CD63,p<0.01）。图C为腺样囊腺癌两种不同细胞系Sacc-83与Sacc-lm来源的外泌体特异性蛋白CD9,CD63,TSG101表达差异(CD9,CD63,P<0.01;TSG101,P<005)。Fig.2WesternblotanalysiswasusedtodetecttheexpressionofspecificproteinsCD9,CD63andTSG101inexosomesderivedfromfourcelllines.1.2SACC及SCC来源的外泌体对比分析1.2.1WesternBlotting(WB)分析4种细胞系外泌体特异性蛋白表达情况显示，舌鳞状细胞癌Tscc-25细胞系外泌体特异性蛋白CD9,CD63表达明显高于腺样囊性癌Sacc-83细胞系表达，差异均具有统计学意义(P＜0.01)(图2B)。同时，腺样囊性癌不同细胞系之间，高转移株Sacc-lm细胞系外泌体中特异性蛋白CD9,CD63明显高于Sacc-83细胞系外泌体特异性蛋白表达，差异均具有统计学意义(P＜0.01)(图2C)。1.2.2NTA分析仪检测4种细胞系提取的外泌体浓度显示,舌鳞状细胞癌Tscc-25,Tscca细胞外泌体的分泌量明显高于腺样囊性癌Sacc-83细胞系，差异具有统计学意义(P＜0.01)。同时，腺样囊性癌不同细胞系Sacc-lm(高转移株)外泌体的分泌量明显高于Sacc-83细胞系，差异具有统计学意义(P＜0.01)(图3)。图3NTA分析4种细胞系分泌的外泌体浓度:腺样囊腺癌两种细胞系Sacc-83,Sacc-lm来源的外泌体浓度检测具有明显的统计学意义（P<0.01）;两
Sacc-83细胞系表达，差异均具有统计学意义(P＜0.01)(图2B)。同时，腺样囊性癌不同细胞系之间，高转移株Sacc-lm细胞系外泌体中特异性蛋白CD9,CD63明显高于Sacc-83细胞系外泌体特异性蛋白表达，差异均具有统计学意义(P＜0.01)(图2C)。1.2.2NTA分析仪检测4种细胞系提取的外泌体浓度显示,舌鳞状细胞癌Tscc-25,Tscca细胞外泌体的分泌量明显高于腺样囊性癌Sacc-83细胞系，差异具有统计学意义(P＜0.01)。同时，腺样囊性癌不同细胞系Sacc-lm(高转移株)外泌体的分泌量明显高于Sacc-83细胞系，差异具有统计学意义(P＜0.01)(图3)。图3NTA分析4种细胞系分泌的外泌体浓度:腺样囊腺癌两种细胞系Sacc-83,Sacc-lm来源的外泌体浓度检测具有明显的统计学意义（P<0.01）;两种不同肿瘤细胞Sacc-83与Tscc-25来源的外泌体浓度检测同样具有明显的统计学意义（P<0.01）。Fig.3NTAanalyzedtheconcentrationsofexosomesecretedbythefourcelllines.
【参考文献】：
期刊论文
[1]肿瘤外泌体的提取与鉴定[J]. 叶冬熳,于韬. 现代肿瘤医学. 2018(20)
[2]TGF-β1在涎腺腺样囊性癌发生发展中的研究进展[J]. 王新宦,宫惠敏,王晓峰. 现代肿瘤医学. 2017(18)
本文编号：3612182
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
透射电镜观察到四种细胞系来源的外泌体形态及直径(A-D;50000×，80kv)：图A为Sacc-83
新疆医科大学硕士学位论文121.1.3WesternBlotting分析：四种细胞系培养上清中提取的外泌体中均可检测到外泌体特异性标志蛋白CD9,CD63及TSG101表达（图2A）。图2Westernblot法检测四种细胞系来源外泌体中特异性蛋白CD9,CD63andTSG101的表达:图A为Sacc-83,Sacc-lm,Tscc-25,Tscca四种细胞系来源的外泌体特异性蛋白CD9,CD63,TSG101表达水平。图B为不同肿瘤细胞Sacc-83与Tscca来源的外泌体特异性蛋白CD9,CD63,TSG101表达差异（CD9,CD63,p<0.01）。图C为腺样囊腺癌两种不同细胞系Sacc-83与Sacc-lm来源的外泌体特异性蛋白CD9,CD63,TSG101表达差异(CD9,CD63,P<0.01;TSG101,P<005)。Fig.2WesternblotanalysiswasusedtodetecttheexpressionofspecificproteinsCD9,CD63andTSG101inexosomesderivedfromfourcelllines.1.2SACC及SCC来源的外泌体对比分析1.2.1WesternBlotting(WB)分析4种细胞系外泌体特异性蛋白表达情况显示，舌鳞状细胞癌Tscc-25细胞系外泌体特异性蛋白CD9,CD63表达明显高于腺样囊性癌Sacc-83细胞系表达，差异均具有统计学意义(P＜0.01)(图2B)。同时，腺样囊性癌不同细胞系之间，高转移株Sacc-lm细胞系外泌体中特异性蛋白CD9,CD63明显高于Sacc-83细胞系外泌体特异性蛋白表达，差异均具有统计学意义(P＜0.01)(图2C)。1.2.2NTA分析仪检测4种细胞系提取的外泌体浓度显示,舌鳞状细胞癌Tscc-25,Tscca细胞外泌体的分泌量明显高于腺样囊性癌Sacc-83细胞系，差异具有统计学意义(P＜0.01)。同时，腺样囊性癌不同细胞系Sacc-lm(高转移株)外泌体的分泌量明显高于Sacc-83细胞系，差异具有统计学意义(P＜0.01)(图3)。图3NTA分析4种细胞系分泌的外泌体浓度:腺样囊腺癌两种细胞系Sacc-83,Sacc-lm来源的外泌体浓度检测具有明显的统计学意义（P<0.01）;两
Sacc-83细胞系表达，差异均具有统计学意义(P＜0.01)(图2B)。同时，腺样囊性癌不同细胞系之间，高转移株Sacc-lm细胞系外泌体中特异性蛋白CD9,CD63明显高于Sacc-83细胞系外泌体特异性蛋白表达，差异均具有统计学意义(P＜0.01)(图2C)。1.2.2NTA分析仪检测4种细胞系提取的外泌体浓度显示,舌鳞状细胞癌Tscc-25,Tscca细胞外泌体的分泌量明显高于腺样囊性癌Sacc-83细胞系，差异具有统计学意义(P＜0.01)。同时，腺样囊性癌不同细胞系Sacc-lm(高转移株)外泌体的分泌量明显高于Sacc-83细胞系，差异具有统计学意义(P＜0.01)(图3)。图3NTA分析4种细胞系分泌的外泌体浓度:腺样囊腺癌两种细胞系Sacc-83,Sacc-lm来源的外泌体浓度检测具有明显的统计学意义（P<0.01）;两种不同肿瘤细胞Sacc-83与Tscc-25来源的外泌体浓度检测同样具有明显的统计学意义（P<0.01）。Fig.3NTAanalyzedtheconcentrationsofexosomesecretedbythefourcelllines.
【参考文献】：
期刊论文
[1]肿瘤外泌体的提取与鉴定[J]. 叶冬熳,于韬. 现代肿瘤医学. 2018(20)
[2]TGF-β1在涎腺腺样囊性癌发生发展中的研究进展[J]. 王新宦,宫惠敏,王晓峰. 现代肿瘤医学. 2017(18)
本文编号：3612182
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