牙本质涎磷蛋白转基因小鼠模型的建立和相关研究

发布时间：2022-02-12 16:21

　　牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，DSPP）包括牙本质涎蛋白（dentin sialoprotein，DSP）和牙本质磷蛋白（dentin phosphoprotein，DPP），属于非胶原蛋白，因最早被发现是由成牙本质细胞合成和分泌，一度被认为是牙本质的特异性蛋白而得名。近年来的研究表明，DSPP在其他组织和器官（如骨、软骨、内耳等）中也表达，只是表达水平相对较低而已，提示DSPP的功能可能并非局限于牙齿的发育和矿化。为进一步探讨DSPP在牙齿发育和矿化中的作用，并在此基础上对DSPP的功能做更加全面的研究，本研究在DSPP功能研究的在体模型的构建方面做了一些尝试，核心内容是建立DSPP的转基因和基因敲除小鼠系。本文是全面研究规划中的一部分，即DSP转基因小鼠模型、DSPP四环素调控性转基因小鼠体系、DSPP特异性启动子调控LacZ转基因小鼠模型的建立和DSPP基因敲除载体的构建以及胚胎干细胞基因打靶。 一、DSP转基因小鼠模型的构建 通过亚克隆将pcDNA3.1中的CMV启动子替换为cβ-actin启动子，构建载体pcDNA3.1-C... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省211工程院校

【文章页数】：126 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

DSP编码序列的PCR结果

peDNA3一DSp的鉴定

符合要求(图2.9)，均扩增出p一actin片段也证明了这一点;来自肾、肺的RNA均扩增出预计大小的片段，而平行对照和阴性对照均没有(图2.10)，表明转基因的确在这些器官有表达。M肾肺对照—285—1851.okb0.skb实验组1.okb〕.skb1.okb0.skb平行对照组p一actin组图2.9总RNA电泳结果图2.10RT-PCR结果2、PTREZ一DSPP将pTREZ一DSPP质粒乃oI酶切线性化并经纯化和稀释后作为显微注射用的DNA。共注射657个受精卵，移植到28只受体鼠中，13只怀孕，共产下85只小鼠，分别编号(#1一#85)。(l)PCR鉴定将pTREZ一DSPP的序列与GenBank的小鼠基因组库进行BLAsT

【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠牙本质涎磷蛋白成熟蛋白编码区cDNA克隆与部分序列分析[J]. 郝建军,汪平,麻孙恺,江卫民,费俭,刘正.  中华口腔医学杂志. 1999(06)
[2]小鼠输精管内转染法建立人组织型纤溶酶原激活剂（tPA）乳腺定位表达生物反应器的研究[J]. 黄伟民,赖良学,乔桂林,岳军明,安靓,王凯,付殿国,殷震,李进.  实验生物学报. 1999(03)
[3]精子介导外源DNA转移的研究进展[J]. 刘红林,陈宜峰.  生物工程进展. 1997(02)
[4]牙本质磷蛋白[J]. 赵大为.  牙体牙髓牙周病学杂志. 1995(03)

博士论文
[1]遗传性牙本质发育不全Ⅱ型致病基因的定位与克隆[D]. 王英.第四军医大学 2001
[2]牙本质涎磷蛋白在牙齿发育、矿化及牙髓损伤修复中作用的研究[D]. 张蓉.第四军医大学 2001



本文编号：3622042