寡核苷酸对Pg感染人牙周膜细胞的免疫调控作用

发布时间：2022-04-27 22:33

　　牙周炎是由牙菌斑生物膜等因素引起的牙周组织慢性感染性疾病,可导致牙槽骨吸收,进而引起牙齿脱落,影响咀嚼功能甚至影响生活质量。目前,我们通过牙周基础治疗控制疾病炎症发展,但难以完全有效地恢复已丧失的牙槽骨组织,针对这一临床问题,促进牙周组织再生受到关注,通过植入生长因子、支架材料及种子细胞实现牙槽骨重塑促进牙周组织修复,已成为牙周临床发展的关键。近年研究发现寡核苷酸（ODN）参与细胞免疫和骨改建过程,具有研究意义。前期实验中,免疫抑制型ODN MT01可促进感染状态下的人骨肉瘤细胞MG63细胞成骨向分化。本实验将12条不同的ODN序列刺激培养人牙周膜细胞（hPDLCs）,筛选出促进增殖和增强碱性磷酸酶（ALP）活性的ODN,并应用筛选出的ODN刺激健康和感染状态下的hPDLCs,检测细胞周期、细胞凋亡情况和细胞内炎性细胞因子的表达情况进行比较分析。方法:1.体外提取培养hPDLCs;培养牙龈卟啉单胞菌。2.采用MTT法检测12条不同序列ODN刺激下hPDLCs的增殖活性。3.采用磷酸苯二钠微板法检测12条不同序列ODN刺激下hPDLCs中碱性磷酸酶活性。4.采用流式细胞术检测筛选出的特定... 

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中文摘要
Abstract
第1章 引言
第2章 文献综述
    2.1 ODN概述
    2.2 ODN在牙周方向的相关研究
    2.3 ODN的体内代谢
第3章 实验研究
    3.1 实验材料与仪器
        3.1.1 主要材料与试剂
        3.1.2 主要仪器与设备
        3.1.3 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 hPDLCs原代培养
        3.2.2 MTT法检测细胞增殖活性
        3.2.3 磷酸苯二钠微板法检测细胞ALP活性
        3.2.4 牙龈卟啉单胞菌培养
        3.2.5 流式细胞术检测细胞凋亡
        3.2.6 流式细胞术检测细胞周期
        3.2.7 RT-PCR检测细胞炎性因子表达
            3.2.7.1 引物设计和合成
            3.2.7.2 细胞总RNA提取
            3.2.7.3 细胞cDNA合成
            3.2.7.4 RT-PCR反应
        3.2.8 统计学分析
第4章 实验结果
    4.1 培养hPDLCs的形态表现
    4.2 ODN对hPDLCs的细胞毒性影响
    4.3 ODN对hPDLCs内ALP活性影响
    4.4 牙龈卟啉单胞菌的形态表现
    4.5 ODN对健康和感染状态hPDLCs细胞凋亡率影响
    4.6 ODN对健康和感染状态hPDLCs细胞周期百分比影响
    4.7 ODN对健康和感染状态hPDLCs炎性因子mRNA表达影响
第5章 讨论
    5.1 ODN促进hPDLCs的细胞增殖活性
    5.2 ODN促进hPDLCs的ALP活性
    5.3 ODN缩短健康和感染状态下hPDLCs G1期并促进细胞进入S期
    5.4 ODN抑制健康和感染状态下hPDLCs凋亡
    5.5 ODN调控健康和感染状态下hPDLCs炎症因子表达
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]含CpG-ODN基序重组抑制素质粒的构建及其对小鼠颗粒细胞相关凋亡基因表达的影响[J]. 阳美霞,张虹亮,李蓝祁,张羽芳,杨利国,王水莲.  畜牧兽医学报. 2018(08)
[2]MT01对实验性牙移动大鼠牙周组织中TLR9、TRAF6和IL-6表达水平的影响[J]. 杨竹君,侯旭,于文雯,闫阔,申玉芹,孙新华.  吉林大学学报(医学版). 2017(04)
[3]MT01对感染状态人成骨样细胞内ALP活性及mRNA表达的影响[J]. 高涵,申玉芹,刘引,胡天琦,费鸿博,顾中一,李洋洋,林崇韬.  口腔医学研究. 2016(06)
[4]MT01对Pg感染的成骨细胞MG63特异性成骨相关因子表达的影响[J]. 周岳,申玉芹,高涵,刘引,于海蛟,林崇韬.  口腔医学研究. 2016 (01)
[5]特定序列寡核苷酸MT01对牙龈卟啉单胞菌感染的成骨细胞的增殖、细胞周期及凋亡的影响[J]. 于海蛟,申玉芹,刘引,高涵,周岳,胡天琦,林崇韬.  华西口腔医学杂志. 2015(06)
[6]牙龈卟啉单胞菌感染MG63细胞对细胞周期的影响[J]. 潘春玲,赵海礁,谭丽思,潘亚萍,钟鸣.  口腔医学研究. 2015(09)
[7]MTT比色法研究应用进展[J]. 李上标,裴淑艳,蒋超,马玉,郭忠.  西北民族大学学报(自然科学版). 2013(03)
[8]牙龈卟啉单胞菌诱导骨细胞凋亡的实验研究[J]. 唐保柱,任晓斌,陈玉华,和红兵.  中国实用口腔科杂志. 2010(10)

硕士论文
[1]Cy5标记寡脱氧核苷酸MT01在大鼠重要脏器组织中的分布[D]. 张超.吉林大学 2014



本文编号：3649277