体外诱导小鼠牙龈间充质干细胞向上皮样细胞分化

发布时间：2017-05-14 11:11

  本文关键词：体外诱导小鼠牙龈间充质干细胞向上皮样细胞分化，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：创面迅速再上皮化是减少瘢痕形成,提高大面积上皮缺损修复率的关键,研究发现,骨髓间充质干细胞(BMSCs)在一定条件诱导下可向上皮样细胞、肾上皮细胞、肠上皮细胞、角膜上皮细胞等方向分化,但随培养代数增加,BMSCs增殖速率减慢,细胞形态改变,分化能力下降,基因改变,限制了BMSCs的大规模应用。近年学者从牙龈组织中分离培养出牙龈间充质干细胞(GMSCs),同BMSCs相比, GMSCs具有取材容易,增殖速率高,长期培养性能稳定,不易衰老等特性。实验显示,3D微球GMSCs注入小鼠静脉后,可归巢于病损区的上皮层和上皮下层,可能经历间充质-上皮转化(MET)分化为上皮样细胞修复上皮损伤。目前,诱导GMSCs向上皮样细胞分化及(MSCs的迁移机制尚无报道,本课题拟采用体外加入细胞因子的方法诱导小鼠GMSCs向上皮样细胞分化,探讨炎性因子IL-6、IL-10对小鼠GMSCs向上皮样细胞分化的影响,并研究SDF-1能否诱导小鼠GMSCs迁移,为将GMSCs作为新的种子细胞治疗上皮损伤提供一定实验基础。方法：1.酶解法培养小鼠牙龈间充质干细胞,流式细胞术检测表面标记物CDllb、CD45、CD34、CD31、CD105、CD140、CD29、CD44、sca-1。2.诱导培养液(lOuM ATRA+20ng/ml EGF+5%FBS+DMEM培养基)培养牙龈间充质干细胞14天后,观察细胞形态,细胞免疫组织化学、免疫荧光检测角蛋白18及波形蛋白表达情况。3.根据诱导条件的不同进行分组,将普通培养液、诱导培养液、诱导培养液+IL-6、诱导培养液+IL-10分别设为对照组、诱导组、IL-6诱导组、IL-10诱导组,诱导培养细胞14天后,免疫组化、免疫荧光检测各组细胞角蛋白18及波形蛋白表达情况,并计数免疫荧光阳性细胞比例,比较各组间有无差别。MTT测定各组细胞11天内的增殖曲线。4.使用transwell小室检测SDF-1能否诱导小鼠GMSCs迁移。实验组：下室为100ng/ml SDF-la+2%FBS+DMEM培养基,上室为2%FBS+DMEM培养基。对照组：上下室均为2%FBS+DMEM培养基。上室接种细胞,22h后DAPI染色,计数迁移至膜下表面的细胞数。结果：1.培养出小鼠牙龈细胞,为典型成纤维细胞形态,流式细胞术检测其间充质干细胞标记物阳性,证实该细胞为牙龈间充质干细胞,符合进一步实验条件。2.诱导培养液培养后,牙龈间充质干细胞形态呈多角形、类铺路石样,免疫组化、免疫荧光示角蛋白18、波形蛋白阳性,而阴性对照组角蛋白18阴性,波形蛋白阳性。3.免疫组化、免疫荧光检测诱导组、IL-6诱导组、IL-10诱导组角蛋白18、波形蛋白阳性,各组染色程度无明显差异,阳性细胞比例无明显差异(P0.05)。对照组角蛋白18阴性、波形蛋白阳性。各实验组同对照组相比,角蛋白18阳性细胞比例有明显差异(P0.01),波形蛋白阳性细胞比较无明显差别(P0.05)。细胞增殖实验显示：第1、3、5、7、9天,各实验组A值均与对照组有明显差别(P0.05),第3、5、7、9、11天时,IL-6诱导组A值与诱导组有明显差别(P0.05),只有第3天时IL-10诱导组A值与诱导组有明显差别(P0.05),其余时间均无明显差别(P0.05)。4.实验组同对照组相比,迁移至膜下表面的细胞数明显增多(P0.01)。结论：本实验中我们成功分离培养出小鼠GMSCs,发现小鼠GMSCs在一定浓度ATRA及EGF诱导下可表达上皮细胞标记物角蛋白18,提示其向上皮样细胞分化,致炎因子IL-6、抑炎因子IL-10对此诱导条件下GMSCs表达角蛋白18无明显促进或抑制作用,为将GMSCs作为种子细胞修复上皮损伤提供了一定实验基础。研究GMSCs的迁移机制发现,一定浓度的SDF-1可明显诱导小鼠GMSCs迁移,GMSCs的迁移机制可用于促进GMSCs归巢至损伤部位,增强其修复损伤能力。
【关键词】：间质干细胞 上皮样细胞 细胞分化 细胞迁移 趋化因子CXCL12
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R78
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 主要符号及缩略词12-13
• 前言13-16
• 材料与方法16-21
• 结果21-24
• 讨论24-28
• 结论28-29
• 综述29-36
• 附图36-42
• 参考文献42-49
• 致谢49-50
• 附件50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 朱红燕;张宏;傅晋翔;张学光;;骨髓间充质干细胞与急性皮肤放射损伤的修复[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年32期

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本文编号：365008