miR-125b/NKIRAS2/NF-κB信号通路在人牙周膜细胞成骨分化过程中的作用及机制研究

发布时间：2022-05-08 11:15

　　目的:牙周组织具有改建和再生的能力,正畸牙移动的过程需要牙周组织骨吸收和骨生成平衡。大量研究表明牙周膜细胞（PDLCs）在牙周组织的自我更新及牙周炎疾病组织的修复与再生过程中发挥了重要的调控作用,它是牙周缺损修复的细胞学基础。所以明确PDLCs骨向分化的调控机制,将有助于进一步优化牙周组织再生的治疗方法,为实现从基础研究到临床运用的转变提供依据。miRNAs参与生命活动过程中一系列的重要进程。许多研究表明,miRNAs能通过调控成骨信号通路上关键的转录因子和成骨标志性基因来促进或者抑制骨前体细胞和成骨细胞的分化。因此,研究牙周膜细胞成骨分化过程中重要的转录后调控分子miRNAs的变化情况,探明其中可能的调控机制,为寻找可能的miRNAs治疗方法提供理论依据,能为提高牙周膜细胞修复组织缺损的临床应用提供研究基础。miR-125b是最早发现的miRNA之一,在调控细胞增殖和分化过程中具有十分重要的作用。研究发现,miR-125b可抑制人骨髓MSCs成骨分化过程中Samd4表达水平,从而影响MSCs成骨分化过程,下调MSCs细胞miR-125b的表达可促进MSCs的成骨分化。在牙周膜干细胞成... 

【文章页数】：86 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:miRNA-125b在hPDLCs成骨分化过程中的生物学功能
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料与试剂
            2.1.1 实验主要试剂
            2.1.2 仪器设备、材料
        2.2 实验方法
            2.2.1 牙周膜细胞的分离和培养
            2.2.2 牙周膜细胞的鉴定
            2.2.3 CCK-8法细胞增殖分析
            2.2.4 牙周膜细胞成骨诱导分化
            2.2.5 牙周膜细胞成骨分化能力鉴定
            2.2.6 RT-qPCR检测miRNA-125b的表达
            2.2.7 细胞转染
            2.2.8 RT-qPCR检测转染后miR-125b的表达量
            2.2.9 miRNA-125b转染后hPDLCs成骨分化能力鉴定
            2.2.10 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 牙周膜细胞的培养及鉴定
        3.2 牙周膜细胞增殖检测
        3.3 牙周膜细胞成骨分化能力
            3.3.1 茜素红染色和ALP染色
            3.3.2 ALP活性及钙离子沉积量检测
            3.3.3 RT-qPCR检测成骨基因表达
        3.4 miRNA-125b在牙周膜细胞成骨分化过程中的表达变化
        3.5 转染后miRNA-125b表达量检测
        3.6 miRNA-125b抑制hPDLCs体外成骨分化
    4 讨论
    5 结论
第二部分:NKIRAS2在hPDLCs成骨分化过程中的生物学功能
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料与试剂
            2.1.1 实验主要试剂
            2.2.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞转染
            2.2.2 RT-qPCR检测转染后NKIRAS2的表达量
            2.2.3 shRNA-NKIRAS2转染后hPDLCs成骨分化能力鉴定
            2.2.4 NF-κB信号转导通路蛋白检测
            2.2.5 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 转染后NKIRAS2表达量检测
        3.2 沉默NKIRAS2基因抑制hPDLCs成骨分化能力
        3.3 NKIRAS2基因抑制NF-κB通路
    4 讨论
    5 结论
第三部分:miRNA-125b靶向调控NKIRAS2基因影响hPDLCs成骨分化
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料与试剂
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 靶基因NKIRAS2的表达检测
            2.2.2 miRNA-125b与sh-NKIRAS2共转染后hPDLCs成骨功能检测
            2.2.3 NF-κB信号通路相关蛋白检测
            2.2.4 统计学分析
    3 结果
        3.1 靶基因NKIRAS2检测结果
        3.2 miRNA-125b通过NKIRAS2负向调控hPDLCs成骨分化
        3.3 miRNA-125b通过NF-κB通路负向调控hPDLCs成骨分化
    4 讨论
    5 结论
本研究创新型的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]应用基因芯片分析牙周膜干细胞向成骨细胞分化过程中miRNA表达谱的差异[J]. 吕红兵.  中国医学工程. 2014(05)
[2]miR-125b通过靶向抑制Smad4调控骨髓间充质干细胞成骨分化[J]. 陆细红,邓敏,贺洪辉,曾德辉,张卫.  中南大学学报(医学版). 2013(04)
[3]miR-125b调节C3H10T1/2间充质干细胞中Cbfβ的表达[J]. 周维,谢肇,许建中.  第三军医大学学报. 2012(11)
[4]hsa-miR-654-5p通过抑制骨形态发生蛋白2调控人骨髓基质干细胞成骨分化[J]. 魏均强,陈华,郑晓飞,张伯勋,王岩,唐佩福,佘飞,宋青,黎檀实.  南方医科大学学报. 2012(03)
[5]miR-125b对人骨髓间充质干细胞成骨潜能的影响[J]. 马张稳,杜胜利,田红英,刘宗克,冯阳阳.  齐齐哈尔医学院学报. 2011(04)
[6]三种方法原代培养人牙周膜细胞[J]. 蒋俊强,王忠朝,黎春晖,蔡炜.  中国组织工程研究与临床康复. 2010(23)
[7]骨碎补柚皮苷对人牙周膜细胞增殖、碱性磷酸酶活性影响的实验研究[J]. 蒋俊强,丁一,李小玉,蔡炜,王忠朝.  华西口腔医学杂志. 2009(05)
[8]人牙周膜细胞原代培养及鉴定[J]. 李隽,胥春,郝轶,张富强.  上海交通大学学报(医学版). 2008(11)
[9]体外培养人牙周膜细胞方法的探讨[J]. 张丽,王永,张军梅,侯豫,吴承龙,王文秀.  贵阳医学院学报. 2008(05)
[10]狗牙周膜细胞三维立体培养的体外实验研究[J]. 鲁红,吴织芬,田宇,陈书军.  实用口腔医学杂志. 2003(04)

博士论文
[1]miR-125b调控人骨髓间充质干细胞成骨机制的研究[D]. 汪华清.第三军医大学 2015



本文编号：3651557