炎症微环境对大鼠间充质干细胞增殖及Sirt6表达水平的影响

发布时间：2022-07-07 10:19

　　目的 :分析沉默信息调控因子6 （silent information regulator 6,Sirt6）在大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）中的表达情况,以及炎症微环境对其表达水平的影响,为研究Sirt6在牙周炎症条件下骨形成中的作用提供理论依据。方法:根据实验分为脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导组、对照组和LPS过表达Sirt6组。经10μg/mL LPS刺激6、12、24、48、72 h,建立细胞的炎症微环境;CCK-8法检测细胞的增殖水平;酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测炎性因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）的表达;免疫荧光技术检测Sirt6的分布情况;通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术、蛋白质印迹法（western blot）检测Sirt... 

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验动物
    1.2 实验试剂及仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 SD大鼠BMSCs体外分离培养与鉴定
        1.3.2 CCK-8法检测炎症微环境下大鼠BMSCs的增殖能力
        1.3.3 BMSCs体外多向分化能力的测定
        1.3.4 免疫荧光技术检测Sirt6蛋白的分布
        1.3.5 ELISA检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达
        1.3.6 RT-PCR检测Sirt6的mRNA表达水平
        1.3.7 Western blot技术检测BMSCs细胞中Sirt6的表达
    1.4 数据分析
2 结果
    2.1 流式细胞仪检测BMSCs中CD34、CD40、CD90、CD29的表达
    2.2 CCK-8检测不同条件下BMSCs的增殖情况
    2.3 茜素红和油红O染色测定
    2.4 免疫荧光染色显示Sirt6的表达
    2.5 ELISA检测BMSCs培养基中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达
    2.6 RT-PCR检测Sirt6的mRNA水平
    2.7 Western blot技术检测BMSCs细胞中Sirt6的表达
3 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定[J]. 姚灿,郏舜杰,陈海啸,洪盾,朱敏,范厉龙,吕海燕.  医学研究杂志. 2013(05)



本文编号：3656244