成肌细胞G0期模型构建及应力诱导下p38与JNK交互对话调控细胞周期

发布时间：2022-07-07 14:29

　　目的:本实验首先建立L6成肌细胞静止期（G0期）模型,细胞在G0期仍可被激活并重新进入细胞循环周期,以确保后续实验中细胞基本处于均衡一致状态,且活力尚可。在此基础,模拟成肌细胞应力加载模型,在宏观层面观察应力刺激成肌细胞体外生长时,细胞周期变化。从微观层面探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK Mitogen--Activated Proton Kinase）信号通路中p38 MAPK与JNK如何交互作用调节下游相关蛋白最终参与到周期调节中,为阐明颌面部肌肉适应性改建的机制提供依据,为功能矫形治疗提供理论支持。方法:实验对象为大鼠成肌细胞L6,传代培养后诱导细胞进入暂不分裂的休眠期,运用流式细胞术和蛋白免疫印迹法分别检测细胞周期改变和Ki67表达变化,确认基本所有细胞进入G0期。使用含10%胎牛血清的促增殖培养液激活细胞,使重新进入G1期。分别于6 h、12 h、18 h、24 h观察细胞数目及活力,提取样本,检测细胞周期的变化、增殖标志性蛋白Ki67及其他周期相关蛋白变化。将重新激活12 h的细胞分为对照组及加力组,加力组细胞施以周期性应力,时间分别为1 h、3 h、6 h、12 h,加载... 

【文章页数】：95 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第一部分 成肌细胞体外培养-G0期模型的构建
    材料与方法
        一、实验材料
        二、实验方法
    结果
        一、L6成肌细胞体外培养形态学观察
        二、G0期成肌细胞激活过程形态学观察
        三、G0期及细胞激活过程中细胞周期变化
        四、G0期及细胞激活过程中相关蛋白表达变化
    讨论
        一、L6成肌细胞体外培养最佳条件
        二、G0模型构建意义
    结论
第二部分 应力作用下p38与JNK交互对话影响L6成肌细胞周期
    材料与方法
        一、实验材料
        二、实验方法
    结果
        一、细胞形态及分布的观察
        二、流式细胞周期变化及统计分析结果
        三、Western Blot相关蛋白表达
    讨论
        应力刺激激活细胞骨架相关蛋白
        丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）途径
    结论
第三部分 p38特异性抑制剂对周期及蛋白表达的影响
    材料与方法
        一、实验材料
        二、实验方法
    结果
        一、SB203580可基本抑制p38通路活性
        二、抑制剂对细胞周期的影响
        三、特异性抑制剂对通路及相关蛋白的影响
    讨论
    结论
参考文献
综述
    综述参考文献
临床病例展示
攻读学位期间的研究成果
致谢



本文编号：3656589