牙龈卟啉单胞菌通过miR-21/PDCD4/AP-1负反馈环路提高cyclin D1表达促进口腔鳞癌细胞增殖

发布时间：2022-10-30 20:39

　　目的:牙周炎是牙周支持组织的慢性感染性疾病,是危害人类口腔健康的主要疾病之一。重度牙周炎患者的深牙周袋面积可达72crrm2,是大量细菌及炎性因子的储库,可引起邻近及远隔组织器官的疾病。大量研究发现牙周炎与多种全身系统性疾病存在相关性,如心血管疾病、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病、低出生体重儿等。近20年,一些学者开始关注牙周炎及其致病菌与恶性肿瘤的关系研究。目前已有多项研究报告了牙周炎及其致病菌与恶性肿瘤,尤其是口腔癌之间可能存在相关关系。Virchow认为肿瘤起源于慢性炎症位点,慢性炎症环境富含炎症细胞、生长因子、活化的基质和DNA损伤促进剂等,在这种环境下持续的细胞增殖可能加强和提升肿瘤发生的风险。P.gingivalis是一种革兰阴性厌氧杆菌,多在慢性牙周炎患者中检出,是毒力最强的牙周致病菌之一。P.gingivalis具有许多毒力因子,使细菌能够黏附于口腔表面,并侵入到宿主的牙周组织内,调控宿主细胞的免疫炎症反应。研究表明细胞内的P.gingivalis可以在不同水平对与细胞周期相关的某些分子发挥影响,如cyclin D1、cyclinE、CDK4/6等。可以缩短细胞周期,促进细胞... 

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分: P.gingivalis在口腔鳞癌组织中的检测
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 主要试剂、仪器
            2.1.2 临床样本收集
            2.1.3 实验菌株
        2.2 实验方法
            2.2.1 临床样本HE染色
            2.2.2 临床样本中P.gingivalis荧光原位杂交检测
            2.2.3 临床样本中P.gingivalis的DNA含量检测
        2.3 统计学处理
    3 结果
        3.1 口腔鳞癌临床特征
        3.2 口腔鳞癌患者牙周临床指数与患者临床病理参数的相关性研究
        3.3 荧光原位杂交法检测P.gingivalis在临床样本中的阳性率
        3.4 临床样本中P.gingivalis的DNA含量测定和分析
        3.5 鳞癌组织中P.gingivalis阳性率与口腔鳞癌患者临床病理参数的关系
    4 讨论
    5 结论
第二部分: P.gingivalis促进口腔鳞癌细胞增殖及对肿瘤增殖相关因子的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 主要试剂、仪器
            2.1.2 主要实验菌株和细胞株
            2.1.3 临床样本收集
        2.2 实验方法
            2.2.1 菌株的培养和计数
            2.2.2 细胞培养
            2.2.3 建立P.gingivalis感染Tca8113细胞的模型
            2.2.4 P.gingivalis感染Tca8113细胞的透射电镜观察
            2.2.5 CCK-8法检测P.gingivalis感染Tca8113细胞的增殖活性
            2.2.6 流式细胞仪检测P.gingivalis感染Tca8113细胞后细胞周期分布
            2.2.7 qRT-PCR检测cyclin D1、AP-1 (c-Jun、c-Fos) mRNA
            2.2.8 Western blot分析cyclin D1、AP-1 (c-Jun、c-Fos)及其磷酸化蛋白表达水平
            2.2.9 cyclinD1与AP-1染色质免疫沉淀(CHIP)
            2.2.10 临床样本cyclin D1、AP-1 (c-Jun、c-Fos)免疫组化染色
        2.3 统计学处理
    3 结果
        3.1 P.gingivalis感染口腔鳞癌细胞Tca8113电镜结果
        3.2 P.gingivalis感染口腔鳞癌细胞Tca8113后细胞增殖的变化
        3.3 流式细胞仪检测P.gingivalis感染Tca8113细胞细胞周期的分布
        3.4 P.gingivalis感染Tca8113细胞cyclin D1、AP-1 (c-Jun、c-Fos) mRNA的表达
        3.5 P.gingivalis感染Tca8113细胞cyclin D1、AP-1 (c-Jun、c-Fos)及其磷酸化蛋白的表达
        3.6 P.gingivalis感染促进Tca8113细胞cyclin D1与AP-1的结合活性
        3.7 临床样本AP-1 (c-Jun、c-Fos)、cyclin D1免疫组化结果分析
        3.8 口腔鳞癌组织中P.gingivalis与c-Jun、c-Fos及cyclin D1的相关性分析
    4 讨论
    5 结论
第三部分: P.gingivalis通过miR-21/PDCD4/AP-1负反馈环路提高cyclin D1表达促进口腔鳞癌细胞增殖
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 主要试剂和仪器
            2.1.2 实验菌株和细胞株
            2.1.3 临床样本收集
        2.2 实验方法
            2.2.1 P.gingivalis感染Tca8113细胞后miRNA的芯片筛查
            2.2.2 miRNA实时定量PCR (qRT-PCR)
            2.2.3 miR-21inhibitor转染
            2.2.4 miR-21下游相关基因质粒转染
            2.2.5 CCK-8检测miR-21/PDCD4/AP-1相关基因转染对P.gingivalis感染Tca8113细胞增殖的影响
            2.2.6 qRT-PCR检测转染后miR-21/PDCD4/AP-1相关基因mRNA表达
            2.2.7 Western blot分析转染后miR-21/PDCD4/AP-1相关基因蛋白表达
        2.3 统计方法
    3 结果
        3.1 miRNA芯片结果
            3.1.1 P.gingivalis感染Tca8113细胞差异miRNA表达谱的筛选
            3.1.2 P.gingivalis感染Tca8113细胞差异miRNA功能注释及pathway分析
        3.2 miRNA芯片结果验证
        3.3 临床样本中差异miRNA的检测和分析
        3.4 P.gingivalis感染细胞后miR-21和其靶基因mRNA及蛋白的表达
        3.5 抑制miR-21对P.gingivalis感染所致细胞增殖及靶基因表达的改变
        3.6 过表达PDCD4对细胞增殖及AP-1(c-Jun、c-Fos)激活的影响
        3.7 沉默c-Jun降低AP-1活性对P.gingivalis感染所致miR-21及其靶基因和细胞增殖的影响
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性自我评价
参考文献
综述
    参考文献
在学期间科研成绩
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Presence of Porphyromonas gingivalis in gingival squamous cell carcinoma[J]. Joseph Katz,Mairelys D. Onate,Kaleb M. Pauley,Indraneel Bhattacharyya,Seunghee Cha.  International Journal of Oral Science. 2011(04)
[2]Oral cancer incidence and mortality in China, 2011[J]. Shao-Kai Zhang,Rongshou Zheng,Qiong Chen,Siwei Zhang,Xibin Sun,Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)



本文编号：3699443