神经嵴细胞中过表达Fgf18导致小鼠颅颌面部发育严重异常及其相关机制的初步研究

发布时间：2022-12-10 00:03

　　颅颌面部最常见的一种先天性发育畸形是腭裂,它具有复杂的病因,并且会影响病人的语音功能、吞咽功能以及随后的牙齿萌发和排列。研究发现,在小鼠腭的正常发育过程中有几种不同的信号通路均起着至关重要的作用,主要包括FGF（Fibroblast growth factors）信号通路、WNT（Wingless integrated）信号通路、SHH（Sonic hedgehog）信号通路和BMP（Bone morphogenetic proteins）信号通路。近年来人类全基因组关联研究发现,人类的唇腭裂疾病与FGF18紧密相关。因此为探究FGF18在人类腭裂中的作用机制,本实验构建了Wnt1-Cre;pMes-Fgf18转基因小鼠,以研究小鼠神经嵴细胞中过表达Fgf18对其颅颌面部发育的影响。首先,运用原核显微注射技术成功构建了pMes-Fgf18转基因小鼠;将成年的pMes-Fgf18转基因小鼠与Wnt1-Cre小鼠交配,获得在神经嵴细胞中过表达Fgf18的转基因小鼠Wnt1-Cre;pMes-Fgf18。通过组织形态学观察,发现Wnt1-Cre;pMes-Fgf18小鼠发生腭裂,且出生后大约... 

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
中文文摘
绪论
第一章 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 菌株、质粒与载体
        1.1.2 实验动物
        1.1.3 主要实验仪器与设备
        1.1.4 主要实验试剂
        1.1.5 试剂配制
    1.2 实验方法
        1.2.1 目的基因扩增
        1.2.2 重组质粒构建
        1.2.3 转基因小鼠基因型鉴定
        1.2.4 石蜡包埋与切片
        1.2.5 HE染色
        1.2.6 石蜡切片免疫组化/荧光
        1.2.7 整骨染色
        1.2.8 腭的体外培养
        1.2.9 整体原位杂交
第二章 实验结果
    2.1 pMes-Fgf18转基因小鼠的构建
        2.1.1 pMes-Fgf18-IRES-eGFP质粒的构建
        2.1.2 pMes-Fgf18-IRES-eGFP质粒酶切线性化
        2.1.3 原核显微注射制备pMes-Fgf18转基因小鼠
        2.1.4 条件性过表达Fgf18转基因小鼠的有效性验证
    2.2 神经嵴细胞中过表达Fgf18导致小鼠颅颌面部发育严重异常
    2.3 神经嵴细胞中过表达Fgf18对小鼠上腭发育的影响
    2.4 神经嵴细胞中过表达Fgf18引起小鼠腭裂的机制
        2.4.1 Wrt1-Cre;pMes-Fgf18小鼠腭突的细胞增殖水平无显著性变化
        2.4.2 Wnt1-Cre;pMes-Fgf18小鼠腭突在体外培养过程中能正常发育
        2.4.3 Wnt1-Cre;pMes-Fgf18小鼠的舌头及下颌骨发育异常
    2.5 Fgf18在小鼠颅面部器官发育过程中主要调控的下游信号通路
第三章 分析与讨论
    3.1 神经嵴细胞中过表达Fgf18导致小鼠腭裂
    3.2 小鼠神经嵴细胞中过表达Fgf18导致的腭裂是由舌体增高、下颌缩短引起的
    3.3 小鼠神经嵴细胞中过表达Fgf18改变了RAS/MAPK信号级联反应水平
第四章 结论
附录
    附录1 基因和蛋白质符号说明
    附录2 引物
    附录3 质粒载体
    附录4 细胞转染
参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Differential expression of Bmp2,Bmp4 and Bmp3 in embryonic development of mouse anterior and posterior palate[J]. NIE Xu-guang Sector of Anatomy and Cell Biology, Department of Biomedicine, University of Ber gen, Norway.  Chinese Medical Journal. 2005(20)



本文编号：3715637