不同浓度β-glycerophosphate对牙髓干细胞分化的影响

发布时间：2022-12-10 01:40

　　目的：研究不同浓度β-glycerophosphate对DPSCs向成牙本质细胞分化的影响；探讨在不同时间点，分化成熟相关蛋白DSP和MEPE在不同浓度β-glycerophosphate诱导下表达的变化，从而找到诱导DPSCs分化的最佳β-glycerophosphate浓度。 方法：分离培养人DPSCs，免疫荧光法检测干细胞特异性抗体STRO-1的表达；用不同的诱导液诱导DPSCs分别向脂肪细胞，神经细胞，成骨细胞分化，证实其多向分化能力。向脂肪细胞诱导3周后行油红染色，神经向诱导后检测nestin表达是否阳性，向成骨细胞诱导21天用AlizarinRedS检测矿化结节形成情况；用四种浓度的β-glycerophosphate及不含β-glycerophosphate的矿化诱导培养液培养DPSCs，MTT法检测四种浓度的β-glycerophosphate对细胞增殖是否有抑制作用；分别在第7，14，21，28天提取各组细胞蛋白，Westernblot检测MEPE和DSP的表达情况。培养至28天时，AlizarinRedS矿化结节染色，CPC提取法比较各组形成矿化结节的量。 ... 

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
1、文献综述
    1.1 细胞外基质磷酸糖蛋白（MEPE）
        1.1.1 MEPE 的分子结构
        1.1.2 MEPE 在骨发生上的研究现状
        1.1.3 与牙形成相关的 MEPE7
        1.1.4 不同培养条件下的 MEPE 表达
    1.2 牙本质涎磷蛋白（ DSPP ）
    1.3 DPSCs 向成牙本质细胞的分化及矿化
    1.4 牙本质形成
    1.5 小结
2、前言
3、材料与方法
    3.1 实验准备
        3.1.1 取材
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器设备
        3.1.4 试剂的配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 分离培养人 DPSCs
        3.2.2 传代培养 DPSCs
        3.2.3 免疫荧光染色鉴定 DPSCs
        3.2.4 DPSCs 多向分化能力
        3.2.5 不同浓度β- glycerophosphate 诱导 DPSCs 向成牙本质细胞的分化
        3.2.6 细胞毒性分析
        3.2.7 Western blot 分析
        3.2.8 矿化诱导及定量
        3.2.9 数据分析
4、结果
    4.1 细胞培养
        4.1.1 分离培养人牙髓干细胞
        4.1.2 矿化诱导
    4.2 体外鉴定 DPSCs 多向分化能力及免疫显型
    4.3 细胞毒性分析
    4.4 DPSCs 分化过程中的蛋白表达
    4.5 矿化分析
5、讨论
6、结论
8、参考文献
研究成果



本文编号：3715796