探究慢病毒介导BMP-2及VEGF-165转染山羊BMSCs向成骨方向分化的影响
发布时间：2022-12-25 15:42
目的:探究慢病毒介导骨形态发生蛋白2（Bone Morphogenetic protein 2,BMP-2）及血管内皮生长因子165（Vascular endothelial growth factor 165）转染山羊骨髓间充质干细胞（Goat bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）向成骨方向分化的影响;方法:采用全骨髓贴壁法培养原代山羊的骨髓间充质干细胞,传代后在慢病毒的介导下导入目的基因,研究山羊BMSCs作为基因共转移靶细胞的可行性,以及细胞的体外培养条件、增殖情况,转染后向成骨方向分化等生物学变化。结果:BMP-2 mRNA的表达与BMP-2组无明显差异（P＞0.05）,VEGF-165mRNA的表达与VEGF-165组无明显差异（P＞0.05）;Lv-BMP2-VEGF165转染组OCN mRN A的表达高于单基因转染组（P＜0.05）;BMP2和VEGF165蛋白只有在Lv-BMP2-VEGF165组中高效率表达;Lv-BMP2-VEGF165组OCN蛋白的表达显著高于其他各组（p＜0.01）,Lv-BMP2-VEGF165转染...
【文章页数】：43 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中英文缩略词对照表
摘要
Abstract
前言
1 研究内容与方法
1.1 研究对象
1.2 纳入排除标准
1.2.1 纳入标准
1.2.2 排除标准
1.3 实验试剂与仪器
1.4 实验分组
1.5 全骨髓贴壁法分离培养山羊BMSCs
1.6 茜素红染色(PH=8.3)检测细胞成骨诱导分化
1.7 MTT法检测细胞增殖活性
1.8 细胞转染
1.8.1 细胞的准备
1.8.2 慢病毒感染预实验
1.8.3 转染后引物的设计及BMP-2、VEGF-165mRNA的检测
1.8.4 转染后ELISA法检测各组BMP-2、VEGF-165、OCN相对蛋白的表达
1.9 质量控制
1.10 统计学分析
1.11 技术路线图
2 结果
2.1 原代细胞贴壁法分离纯化及鉴定
2.2 茜素红染色(PH=8.3)检测细胞成骨诱导分化
2.3 MTT法检测转染前后细胞的生长活性
2.4 各组BMP2mRNA、VEGF165mRNA、OCNmRNA的表达
2.5 各组BMP2、VEGF165 蛋白、OCN蛋白的表达
2.6 转染后碱性磷酸酶活性的检测(改良Gomori钙钴法)
3 讨论
3.1 骨髓间充质干细胞(BMSCs)
3.1.1 骨髓间充质干细胞分离及纯化
3.1.2 BMP-2、VEGF-165 定向诱导骨髓间充质干细胞的机制
3.2 慢病毒作为载体的相关研究
3.3 成骨机制及指标
3.4 创新与意义
3.5 不足与展望
4 小结
4.1 结论一
4.2 结论二
5 致谢
6 参考文献
综述
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
导师评阅表
【参考文献】：
期刊论文
[1]多种特殊状态下关节软骨缺损修复的组织工程技术[J]. 陈劲松,王中汉,常非,刘贺. 中国组织工程研究. 2020(08)
[2]控释重组人骨形态发生蛋白-2和血管内皮生长因子的微囊支架对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响[J]. 任前贵,张坤,任威,孙韬,李永峰,马丽波. 中国生物制品学杂志. 2019(12)
[3]补肾活血方对大鼠骨折模型的愈合作用及对BMP-2、VEGF及TGF-β1表达的影响[J]. 陈冠儒,张翔,许兵. 中国中医急症. 2019(12)
[4]慢病毒介导骨形态发生蛋白7基因转染诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化[J]. 张文,雷堃,高磊,李宽新. 中国组织工程研究. 2020(07)
[5]生物支架材料诱导脂肪来源干细胞成骨分化的最新热点[J]. 张圣敏,刘超. 中国组织工程研究. 2020(07)
[6]骨化醇治疗对绝经后骨质疏松妇女血清硬化素及成纤维细胞 生长因子23水平的影响[J]. 周士进,徐毅. 临床与病理杂志. 2019(11)
[7]3D打印聚己内酯/纳米羟基磷灰石复合支架与骨髓间充质干细胞的体外生物相容性[J]. 胡超然,邱冰,周祝兴,杨洋,李佳. 中国组织工程研究. 2020(04)
[8]ERK1/2-Runx2信号通路在TNF-α对牙周膜干细胞成骨分化影响中的作用[J]. 韩耀伦,王璐,马欣. 中国免疫学杂志. 2019(21)
[9]pEGFP-N1-BRCC3重组质粒的构建、鉴定及其表达[J]. 程芯育,钟海凤,徐绍业,张聪慧,韦睿妮,邵晓云. 广东医学. 2019(19)
[10]微RNA调控骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展[J]. 王宏润,李宏宇. 医学综述. 2019(20)
硕士论文
[1]人诱导多能干细胞系的建立[D]. 王旭东.内蒙古大学 2019
[2]骨髓间充质干细胞来源外泌体对大鼠脊髓损伤后周细胞活化及血脊髓屏障的影响[D]. 张锐毅.郑州大学 2019
本文编号：3726896
【文章页数】：43 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中英文缩略词对照表
摘要
Abstract
前言
1 研究内容与方法
1.1 研究对象
1.2 纳入排除标准
1.2.1 纳入标准
1.2.2 排除标准
1.3 实验试剂与仪器
1.4 实验分组
1.5 全骨髓贴壁法分离培养山羊BMSCs
1.6 茜素红染色(PH=8.3)检测细胞成骨诱导分化
1.7 MTT法检测细胞增殖活性
1.8 细胞转染
1.8.1 细胞的准备
1.8.2 慢病毒感染预实验
1.8.3 转染后引物的设计及BMP-2、VEGF-165mRNA的检测
1.8.4 转染后ELISA法检测各组BMP-2、VEGF-165、OCN相对蛋白的表达
1.9 质量控制
1.10 统计学分析
1.11 技术路线图
2 结果
2.1 原代细胞贴壁法分离纯化及鉴定
2.2 茜素红染色(PH=8.3)检测细胞成骨诱导分化
2.3 MTT法检测转染前后细胞的生长活性
2.4 各组BMP2mRNA、VEGF165mRNA、OCNmRNA的表达
2.5 各组BMP2、VEGF165 蛋白、OCN蛋白的表达
2.6 转染后碱性磷酸酶活性的检测(改良Gomori钙钴法)
3 讨论
3.1 骨髓间充质干细胞(BMSCs)
3.1.1 骨髓间充质干细胞分离及纯化
3.1.2 BMP-2、VEGF-165 定向诱导骨髓间充质干细胞的机制
3.2 慢病毒作为载体的相关研究
3.3 成骨机制及指标
3.4 创新与意义
3.5 不足与展望
4 小结
4.1 结论一
4.2 结论二
5 致谢
6 参考文献
综述
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
导师评阅表
【参考文献】：
期刊论文
[1]多种特殊状态下关节软骨缺损修复的组织工程技术[J]. 陈劲松,王中汉,常非,刘贺. 中国组织工程研究. 2020(08)
[2]控释重组人骨形态发生蛋白-2和血管内皮生长因子的微囊支架对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响[J]. 任前贵,张坤,任威,孙韬,李永峰,马丽波. 中国生物制品学杂志. 2019(12)
[3]补肾活血方对大鼠骨折模型的愈合作用及对BMP-2、VEGF及TGF-β1表达的影响[J]. 陈冠儒,张翔,许兵. 中国中医急症. 2019(12)
[4]慢病毒介导骨形态发生蛋白7基因转染诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化[J]. 张文,雷堃,高磊,李宽新. 中国组织工程研究. 2020(07)
[5]生物支架材料诱导脂肪来源干细胞成骨分化的最新热点[J]. 张圣敏,刘超. 中国组织工程研究. 2020(07)
[6]骨化醇治疗对绝经后骨质疏松妇女血清硬化素及成纤维细胞 生长因子23水平的影响[J]. 周士进,徐毅. 临床与病理杂志. 2019(11)
[7]3D打印聚己内酯/纳米羟基磷灰石复合支架与骨髓间充质干细胞的体外生物相容性[J]. 胡超然,邱冰,周祝兴,杨洋,李佳. 中国组织工程研究. 2020(04)
[8]ERK1/2-Runx2信号通路在TNF-α对牙周膜干细胞成骨分化影响中的作用[J]. 韩耀伦,王璐,马欣. 中国免疫学杂志. 2019(21)
[9]pEGFP-N1-BRCC3重组质粒的构建、鉴定及其表达[J]. 程芯育,钟海凤,徐绍业,张聪慧,韦睿妮,邵晓云. 广东医学. 2019(19)
[10]微RNA调控骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展[J]. 王宏润,李宏宇. 医学综述. 2019(20)
硕士论文
[1]人诱导多能干细胞系的建立[D]. 王旭东.内蒙古大学 2019
[2]骨髓间充质干细胞来源外泌体对大鼠脊髓损伤后周细胞活化及血脊髓屏障的影响[D]. 张锐毅.郑州大学 2019
本文编号：3726896
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