周期性机械应力诱导的自噬抑制caspase通路依赖的成肌细胞凋亡

发布时间：2023-03-26 12:33

　　目的:观察大鼠成肌细胞(L6 myoblast,L6)在周期性机械应力作用下细胞凋亡与自噬的水平变化,探讨机械应力诱导的细胞自噬对凋亡的作用。方法:构建大鼠成肌细胞力学刺激模型,加载参数为细胞拉伸形变率15%,加力周期包括3 s拉伸及3 s舒张,加力时间为6、12、24 h,以不加力0 h组为对照组。通过Hoechst染色及AnnexinV-FITC/PI染色观察各组细胞凋亡情况;通过MDC染色及透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)评价各组细胞自噬变化;应用Western免疫印迹检测各组凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax及自噬相关蛋白LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、P62表达变化。加入自噬抑制剂3-MA后重复实验,检测各组细胞凋亡情况。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Hoechst染色及AnnexinV-FITC/PI流式结果表明,大鼠成肌细胞在周期性应力诱导下发生凋亡,24 h时达到凋亡最大值。Western免疫印迹结果显示,凋亡相关蛋白表达水平随加力时间延长而逐渐升高, caspase抑...

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要实验材料和仪器
    1.2 大鼠成肌细胞培养和体外应力加载模型的建立
    1.3 Hoechest 33258染色
    1.4 AnnexinV-FITC/PI染色
    1.5 Monodansylcadaverine(MDC)染色
    1.6 透射电镜（transmission electron microscopy,TEM）扫描
    1.7 Western蛋白印迹检测
    1.8 统计学分析
2 结果
    2.1 周期性应力作用下大鼠成肌细胞凋亡变化趋势
    2.2 周期性应力介导的大鼠成肌细胞凋亡依赖caspase途径调节
    2.3 周期性应力诱导大鼠成肌细胞自噬
    2.4 自噬抑制周期性应力诱导的caspase依赖的成肌细胞凋亡
3 讨论



本文编号：3770962