Hedgehog信号在斑马鱼牙齿发育及再生中的作用

发布时间：2023-04-12 03:50

　　牙齿是人体的重要器官。牙齿的正常发育也是颌面部正常发育的必要条件。牙齿发育缺陷以及龋病、牙周疾病、外伤、肿瘤等所造成的牙齿缺损、缺失对人体身体和心理健康都有严重的影响。牙齿缺失后无法在体内自行修复再生,临床多采用种植、义齿修复等手段恢复缺失牙形态与功能。随着再生医学的发展,牙齿组织工程再生研究虽取得了极大的进展,但仍存在如何最大程度地诱导出种子细胞的成牙潜能、如何通过基因操控加速发育过程等问题需要解决。牙齿的发育由上皮与间充质的相互作用完成,Hedgehog信号通路是介导这一过程的其中一条信号通路。以小鼠为模式动物的研究集中在Hedgehog信号通路在牙齿发育中的作用,发现该通路不仅参与调控牙齿早期发生,且在后期形态发生过程也有重要作用,但关于Hedgehog信号通路在牙齿再生中的作用没有报道。哺乳类模式动物的局限性阻碍了对牙齿发育调控机制的深入研究。斑马鱼具有与哺乳动物牙齿结构和发育均有极大相似性的咽齿,同时具有活体成像追踪和原位研究的优势。本课题组前期建立了转基因鱼Tg(dlx2b:Dendra2-NTR),利用Mtz/NTR系统构建了咽齿体内损伤再生模型。本课题在此基础上,进一步...

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前言
实验一 Hedgehog信号通路抑制后信号通路相关基因表达变化
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验试剂
                1.2.2.1 LB培养基的配制
                1.2.2.2 原位杂交相关溶液的配制
                1.1.2.3 其他溶液的配制
            1.1.3 实验仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 Total RNA的提取
            1.2.2 反转录制备c DNA
            1.2.3 标准PCR
                1.2.3.1 rTaq PCR
                1.2.3.2 LA Taq PCR
            1.2.4 电转感受态制备
            1.2.5 电转
            1.2.6 质粒筛选、扩增及提取
                1.2.6.1 质粒筛选
                1.2.6.2 质粒扩增
                1.2.6.3 质粒提取
            1.2.7 DNA琼脂糖凝胶电泳回收
            1.2.8 DNA连接(以PGEM-T为载体)
            1.2.9 PCR探针制备(Dig标记)
            1.2.10 探针纯化
            1.2.11 原位杂交
            1.2.12 药物处理实验
    2 实验结果
        2.1 成功制备反义探针
            2.1.1 设计并合成探针引物
            2.1.2 合成探针
        2.2 Cya抑制Hedgehog信号通路后信号通路相关基因变化
    3 结论
实验二 Hedgehog信号通路抑制后斑马鱼咽齿标记基因表达变化 .
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验试剂
            1.1.3 实验仪器
        1.2 实验方法
    2 实验结果
    3 结论
实验三 Hedgehog信号通路抑制后斑马鱼咽齿发育情况
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验试剂
            1.1.3 实验仪器
        1.2 实验方法
    2 实验结果
    3 结论
实验四 斑马鱼咽齿再生模型的进一步探索
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 实验结果
    3 结论
实验五 Hedgehog信号通路抑制后斑马鱼咽齿再生情况
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 实验结果
    3 讨论
全文总结
参考文献
文献综述1
文献综述2
    参考文献
致谢
硕士期间发表的论文



本文编号：3790369